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HPLC测定小儿清解冲剂中梓醇及绿原酸的含量
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【摘要】目的:建立测定小儿清解冲剂中盐梓醇和绿原酸含量的HPLC法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Thermo(HypersilGOLDC18),流动相:乙腈—0.1%磷酸溶液(1:99)测定地黄中梓醇含量;流动相:乙腈—0.4%磷酸溶液(13:87)测定金银花中绿原酸的含量。结果:梓醇的平均加样回收率为98.8%,RSD为1.2%;金银花的平均加样回收率为98.2%,RSD为0.8%。结论:所建鉴别方法专属性强,定量方法简便、准确,能有效地控制制剂的质量。
【关键词】小儿清解冲剂;HPLC;梓醇;绿原酸
小儿清解冲剂为收载于《中药成方制剂第八册》第24页,由金银花、连翘、地骨皮、青黛、白薇、地黄、广藿香和石膏8味组成,具有除瘟解毒,清热退烧的作用。各地零售药店都有出售,老百姓使用较多,但其标准依然老旧。为了有效控制该制剂的质量,采用HPLC法测定了地黄中梓醇的含量;金银花中绿原酸的含量。为该制剂的质量控制提供了实验依据,可进一步完善其质量标准,以确保其临床安全有效。
1.仪器与试药
岛津高效液相(SIL-20A自动进样器、LC-20AT四元泵、SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20A系统控制器),MettlerAe240电子分析天平。小儿清解冲剂(哈尔滨儿童制药厂有限公司,批号为160401);处方中药材(衡阳市药材公司);梓醇对照品(批号110808-200305),绿原酸对照品(批号110753-200413),均由中国生物制品鉴定所提供;乙腈为色谱纯,水为超纯水,其它所用试剂均为分析纯。
2梓醇的含量测定[1]
2.1色谱条件:色谱柱:Thermo(HypersilGOLDC18)柱(250mm×4.6mm,5um);流动相:乙腈—0.1%磷酸溶液(1:99);流速:1.0ml/min;检测波长210nm;柱温:30℃;进样量10ul。
2.2对照品溶液的制备:精密称取梓醇对照品3.13mg,分别至25ml量瓶中,加甲醇适量,超声溶解,用甲醇稀释至刻度,作为对照品的储备溶液。精密取对照品储备溶液1ml,用甲醇稀释至10ml的容量瓶中至刻度,即得。
2.3供试品溶液的制备:取本品研细,混匀,取约2g,精密称定,置锥形瓶中加甲醇50ml,称定重量;加热回流1.5小时,放冷,称定重量后,用甲醇补上减失的重量,摇匀,滤过;量取续滤液10ml,至水浴上浓缩近干;残渣加流动相超声溶解,再转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
2.4线性关系的考察:精密吸取上述梓醇对照品贮备溶液0.10,0.50,1.00,2.00,3.00,6.00置10ml量瓶中,加流动相至刻度。分别精密吸取10ul注入液相色谱仪中测定。线性回归方程分别为Y=37945X-323,r=0.9998,r=0.9990。结果表明梓醇进样量在0.0125~0.7512ug范围内与峰面积线性关系良好。
2.5空白试验:取不含地黄的阴性样品,按供试品溶液制备方法提取,并按上述条件检测。结果在梓醇对照品相同保留时间处无干扰峰出现。(见图1)
2.6精密度试验:取供试品溶液10ul,连续测定进样6次。结果峰面积的RSD为0.95%(n=6),说明仪器的精密度良好,供试品中梓醇含量0.1088%。
2.7稳定性试验:取供试品溶液,分别在2,4,8,10,12,24h依法测定。结果峰面积的RSD为0.85%(n=6),说明供试品溶液制备后在24小时内稳定。
2.8加样回收试验:取经上面已测得含量的供试品,添加梓醇对照品适量,按上述拟定色谱条件进行测定,根据测得量,计算加样回收率,结果见表1。
表1梓醇加样回收试验结果(n=6)
3绿原酸的含量测定[1]
3.1色谱条件:色谱柱:Thermo(HypersilGOLDC18)柱(250mm×4.6mm,5um);流动相:乙腈—0.4%磷酸溶液(13:87);流速:1.0ml/min;检测波长327nm;柱温:30℃;进样量10ul。
3.2对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品5.04mg,至25ml量瓶中,加50%甲醇超声溶解并稀释至刻度,作为对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液1ml至10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得。
3.3供试品溶液的制备:取本品研细,混匀,取约2g,精密称定,置锥形瓶中加50%甲醇溶液20ml,精密称定重量,超声30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇溶液补足减失重量,摇匀,静置,取上清液滤过,即得。
3.4线性关系的考察:精密吸取上述绿原酸对照品贮备液0.10,0.50,1.00,2.00,3.00,6.00置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度。精密吸取10ul注入液相色谱仪中测定。线性回归方程分
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