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Stathmin1基因表达对微管药物抑制细胞增殖作用的影响研究
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摘要:目的:研究Stathmin1基因表达对微管药物抑制细胞增殖作用的影响。方法:分析Stathmin1基因表达与微管药物联合对人肺腺癌细胞A549细胞存活率的影响。结果:0.5μM紫杉醇和去氧鬼臼毒素作用A549细胞时,细胞存活率分别为28.5%、45.8%,Stathmin1与0.5μM紫杉醇、DPPT联合作用A549细胞时,细胞存活率有所下降。结论:Stathmin1基因表达与微管药物结合,能够起到抑制细胞增殖作用,降低肿瘤药物用量。
关键词:Stathmin1基因表达;微管药物;抑制细胞增殖;影响
Stathmin1是一种细胞可溶性磷蛋白,普遍且多数存在于脊椎动物细胞中。基于不同阶段的细胞有丝分裂,其蛋白能够经由磷酸化与去磷酸化的状态进行活性转变调节[1],可以和微管进行结合,对微管的解聚以及重组过程进行加速,或者和游离微管蛋白进行结合对微管的聚合进行阻止,达到对细胞微管动态系统有效调节的作用,从而对细胞增殖以及分化进行有效调节[2]。本文将研究Stathmin1基因表达对微管药物抑制细胞增殖作用的影响,研究如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取2016年5月至2017年8月收集的人肺腺癌细胞A549细胞。
1.2方法
1.2.1人肺腺癌细胞A549培养与转染
将A549细胞培养在器皿中,待其成长到4/5左右,对其进行消化处理,应用0.25%拥有EDTA的胰蛋白酶。后以6×104个/mL细胞浓度,铺设96孔板,待细胞成长到70%左右实行转染,在每个孔里加入0.5μLLipofectamine以及0.2μM干扰质粒,混匀,实行转染。转染5h后更换与之相应的紫杉醇与DPPT培养基,将其放置细胞培养箱内进行培养,1d对荧光表达现象进行观察,2d后对细胞存活率进行检测。
1.2.2MTT法检测细胞存活率
对细胞进行加药物培养2d后,吸掉原有培养基,在每个孔内加入50μL与MTT溶液,放入5%CO2,培养箱调至恒温37℃,置于其中4h,将上清液吸去,每个孔内加入150μLDMSO溶解沉淀,置于摇床上摇30min,在酶标仪上570μm处对吸光值进行检测。
1.3观察指标
①人肺腺癌细胞A549细胞存活率。
2.结果
2.1人肺腺癌细胞A549细胞存活率影响
0.5μM紫杉醇和去氧鬼臼毒素作用A549细胞时,细胞存活率分别为28.5%、45.8%,Stathmin1与0.5μM紫杉醇、DPPT联合作用A549细胞时,细胞存活率分别为21.2%与32.4%。
3.讨论
Stathmin1蛋白能够对细胞周期进行有效调节,也可以在细胞分化中起到一定作用,是一种细胞可溶性磷蛋白。紫杉醇以及DPPT这两类抗癌药物对于肿瘤细胞的抑制都作用于微管。对于紫杉醇而言,其作用是对微管聚合进行有效促进,
并且可以对微管结构进行稳定,以达到阻止抑制微管解聚成为亚单位[3],造成微管异常排列,导致最终形成平稳的非功能性微管束,阻碍有丝分裂纺锤体的发展与形成。而去氧鬼臼毒素则是通过与微管蛋白进行结合,从而达到对微管聚合的抑制作用,让有丝分裂细胞停止在G2/M期。经由相关研究发现,DPPT应用于人肺腺癌细胞A549细胞中,效果要略差于紫杉醇[4]。
由研究分析以及数据研究结果得到,Stathmin1基因表达对微管药物抑制细胞增殖作用有一定影响,可以对细胞增殖进行降低,从而减少肿瘤药物用量。在0.5μM紫杉醇与去氧鬼臼毒素作用A549细胞时细胞存活率要高于0.5μM紫杉醇、DPPT联合作用下A549细胞存活率,由此可见Stathmin1基因表达与微管药物结合可以对细胞增殖产生良性影响。对Stathmin1基因表达进行降低,同时加入紫杉醇进行共同作用,比单独应用Stathmin1基因表达或单独应用紫杉醇,更能降低细胞生长率,促进癌细胞凋亡,减少用药剂量,效果更好。
综上所述,研究Stathmin1基因表达对微管药物抑制细胞增殖作用的影响,发现紫杉醇可以对Stathmin1基因表达进行抑制,而Stathmin1基因表达则可以对紫杉醇微管聚合进行削弱,因此Stathmin1基因表达与微管药物联合能够对细胞增殖进行抑制,减少肿瘤药物用量,为肿瘤治疗提供新的治疗形式。
参考文献:
[1]张彩凤,夏永华,李贞娟,等.StathminsiRNA抑制人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡[J].中国病理生理杂志,2012,28(7):1253-1257.
[2]林芳,高萍,刘昕阳,等.靶向微管解聚蛋白stathminsiRNA对Aβ1-42诱发PC12细胞损伤的保护作用[J].临床与病理杂志,2012,32(5):369-373.
[3]王波,王彬,张连斌,等.TUBB
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