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Solarbio
MitoTracker®RedCMXRos线粒体红色荧光探针
:M9940
:50μg
:-20℃避光干燥保存。
MitoTracker®RedCMXRos是一种细胞渗透型的X-rosamine衍生物,包含标记线粒体的弱巯基反
应性的氯甲基官能团。本品是一种氧化型的红色荧光染料(Ex=579nm,Em=599nm),只需简单
孵育细胞,即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦线粒体被染色后,还能根据
后续实验的需求进行固定(醛类固定剂如甲醛)和透化(醛类去污剂如TritonX-100),探针依然维
持在细胞内。本品适合双标实验,因其红色荧光与其他的绿色荧光探针具有良好的分辨率。
虽然传统的线粒体荧光探针如TMR和罗丹明123,也能很容易的聚集在功能线粒体上,但是一
旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉,从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响
因子的实验中,使其应用大受限制。
CAS号(CASNO.):167095-09-2
分子式(Formula):C32H32Cl2N2O
分子量(Molecularweight):531.52
外观(Appearance):紫色固体
激发波长(Ex):579nm
发射波长(Em):599nm
结构式(Structure):
1.储存液的配制
本品是以粉末形式提供,使用前需将本品回温至室温。之后使用细胞培养级别的无水DMSO将
其充分溶解至终浓度1mM。本品M.Wt.=531.52g/mol,换算下来,50μg粉末只需加入94μLDMSO
即可得到1mM储存液。
可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光,避免反复冻融。
2.工作液的配制
根据不同的实验目的使用不同的探针浓度,以下的起始操作条件仅作参考,可根据细胞类型和
其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。
用适当的缓冲液或者细胞培养基稀释1mM储存液至工作液浓度。一般推荐使用浓度为25-500
nM。对于后续需要做固定或透化的样本,推荐工作浓度为100-500nM,为了降低过度加载导致的潜
在伪影和线粒体毒性,在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外,浓度过高也可能对
其他细胞结构进行染色。
3.染色及检测
第1页共2页
1)贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度,吸除培养液,
加入37℃预热的MitoTracker®RedCMXRos染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45
min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液,即可将其
置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化步骤,见步骤4。
2)悬浮细胞的染色
离心收集细胞,吸除上清,利用37℃预热的MitoTracker®RedCMXRos染色工作液轻轻重悬细
胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,离心收集
细胞,利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞,被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、
荧光显微镜进行分析。
如果需要盖玻片上固定化的细胞,那么可在铺片前先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻
片或盖玻片。或者进行后续的固定和透化步骤,见步骤4。
4.固定和透化
1)染色结束后,利用培养液或缓冲液清洗细胞。
2)小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。经验证,
本染料MitoTracker®RedCMXRos由含3.7%甲醛的完全培养液于37℃孵育内皮细胞15min能起
到良好的固定效果。
3)清洗细胞:吸除固定液,用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4)细胞透化(可选):
像ICC等实验需要细胞要做透化,则可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如TritonX-100的缓
冲液中孵育。透化结束后,用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC实验。经检测,利用含0.2%Triton
X-100的PBS孵育内皮细胞10min可以达到良好的透化效果。
另外,还可利用预冷的丙酮透化5
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