原创力文档- 1、本文档共6页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
琼脂糖凝胶电泳实验
一、实验原理：
琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。把DNA样
品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，
并置于静电场上。由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷
酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分
子的迁移速度取决于分子筛效应。具有不同的相对分子质量的DNA片
段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。凝胶电
泳不仅可分离不同分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，
而构型不同的DNA分子。在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子
质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。相对分子质量标准
参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。在凝胶中加
入少量溴化乙锭(ethidiumbromide,EB)或者ＥＢ类似物，其分子可
插入DNA的碱基之间，形成一种络合物，在254～365nm波长紫外
光照射下，呈桔红色荧光，因此也可对分离的DNA进行检测。
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA
片段。三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为：超螺旋
DNA线性DNA开环DNA
正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之
间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段
分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺
失现象。
适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有
着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下
降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳一定要使用DNAMarker或已知大小的
正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大
小附近ladder较密的，这样对目标片段大小的估计才比较准确。
二、设备：
移液器，微波炉，电泳仪电源，水平式凝胶电泳槽，样品梳，电
子秤，锥形瓶，凝胶成像系统，烧杯，量筒
三、耗材：
PCR产物，质粒，枪头
四、试剂：
1.150×TAE缓冲液：取242gTris碱于1L烧杯中，加入57.1ml的
冰醋酸，100ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0），加入去离子水定容到
1L。取2ml50×TAE缓冲液加入98ml去离子水配成100ml1×TAE稀
释缓冲液备用。
2.21.5%琼脂糖
3.3DNA相对分子质量标准样品：DL2000。
4.4Goldview溶液：一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，
3μl/100ml胶。
5.56×上样缓冲液：商品化产品，贮存于4℃。
五、实验步骤：
1．制备胶液：锥形瓶中的0.75g琼脂糖与50ml1×TAE稀释缓冲
液混匀后放入微波炉里加热至琼脂糖完全融化，取出摇匀。
2．制备胶板：将胶槽置于水平支持物上，插入样品梳，注意梳子
齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙；琼脂糖溶液中加入1.5μl
Goldview溶液使其终浓度为3μl/100ml胶；将琼脂糖小心倒入胶槽
内，使胶液形成均匀的胶层。待胶
文档评论（0）