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浅谈新冠病毒检测中的常见问题及解决办法

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摘要

新冠病毒属于呼吸道感染疾病，目前病毒感染的几率全球也在不断上升。检查患者体内的核酸已经成为确诊的主要依据。但是根据从当前临床分析来看，核酸检测结果并不理想，假阳性、假阴性结果时有发生，这就给新冠病毒核酸检测工作增加了较大的难度，特别是在实验条件设备有限的基础上、检验人员人手紧张时对检验过程提出了较高的要求。特别是对疫情严重要进行全员大规模核酸检测时，如何保证检测结果高效准确尤为重要，文章注重以新冠状病毒核酸检测的多种情况进行分析，探讨了当前核酸检测中存在的主要问题，以期能够为核酸检测提供一些解决问题的方法也为早日战胜疫情尽一份力。

关键词：新冠病毒；核酸检测；结果异常；解决办法

新冠病毒确诊主要有血常规、核酸以及CT胸片检查，核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”，只有经由核酸检测阳性才能确诊。而事实上，新冠肺炎核酸检测的阳性率很低。大量临床病例证实有相当一批核酸阴性病人，早期多次检测都为阴性但最终却证实为无症状感染者，今年七月南京禄口机场事件，不久前的福建莆田新加坡男子事件，中秋节期间哈尔滨外国回来男性感染事件都是进过多次核酸检测为阴性最后才发现阳性导致大面积传播新冠病毒的案例，让我们不得不深刻反思，核酸检测过程中究竟还存在哪些问题，而这些问题必需尽快拟定对策并予以解决。这样才能在以后的检测中注意这些问题加以避免。

当前新冠病毒核酸检测流程涉及问题较多，比如样本采集流程不规范问题、实验室检测核酸假阴性或假阳性问题、厂家试剂间检出能力存在较大差别的问题、实验室质量掌握不达标的问题、很多实验室没有进行室间质控，核酸操作人员手工加样不标准，判读尺度未统一的问题、人员规范化培训问题、生物安全问题等，涉及检测前、检测中和检测后全过程。

下面我们就来分析一下存在哪些问题

一）核酸操作前值得注重的问题

1.样本采集不规范问题：样本采集问题是影响核酸检测的主要问题之一。国家卫健委发布的《新型冠状病毒传染的肺炎诊疗方案（试行第8版）》中指出，在鼻咽拭子、痰、下呼吸道排泄物、血液、粪便等标本中可检测出新型冠状病毒核酸。对于新型冠状病毒肺炎疑似及确诊患者，实验室主要还是咽拭子检测为主，下呼吸道样本含有病毒载量更多，然则因为采样不易或病人无痰，首选标本类型仍为上呼吸道样本，鼻咽拭子。凭据病人病程、医护人员取样手法不同采样量不均一的问题，最终导致假阴性增高。鼻咽拭子采样时要规范，“三个要”要做到，即要深、要转、要取细胞。“要深”即距离从耳垂到鼻尖长度的一半，“要转”即迁移10~15秒，迁移4~5圈，“要取细胞”即取到鼻咽部的细胞。若鼻咽拭子无法采集时，可考虑口咽拭子采样，取样要点要注重用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁3~5次。取样完毕后，将拭子头浸入含3ml病毒留存液管中，尾部弃去，旋紧管盖。为提高检出阳性率，可考虑采用鼻咽拭子和口咽拭子同时采样，采样后放入统一管病毒留存液中。

2.样本留存与运输问题：鼻咽拭子冠状病毒含量少，容易造成漏检；其次新冠病毒为RNA病毒，RNA在空气中轻易降解。样品取样留存、运输过程中都有或者显现降解的问题。我科负责全院患者医护及全县大部分人口的核酸检测，检测的样本来源较多，因为新冠病毒RNA对照轻易降解，所以我们检测总体原则是建议样本采集后室温放置不超过4小时，2℃~8℃不超过24小时，跨越48小时时应该在-70℃留存，且采集的样本运输时需放置专用的转移箱中进行。

3.样本前处理问题：未经灭活的样本对实验人员存在较大平安隐患。我科经由设计严谨的实验方案，终于试探出较为合适的样本灭活前提，即采用56℃灭活30分钟预处理采集的标本后再进行核酸检测，且该方法对新型冠状病毒核酸检测究竟无影响。对操作人员更安全。

（二）实验中值得注意的问题

1.核酸提取环节问题：核酸提取分为手工提取和机械主动提取两种。手工提取过程复杂，步骤繁多会显著增加交叉污染概率，而全自动核酸提取仪系统内一旦显现核酸气溶胶会导致检测“假阳性”，进而导致交叉污染显现假阳性究竟。本实验室采用的是珠海黑马手工提取仪和重庆中元EXM9600全自动提取仪手工仪器提取效率更高一些，每批次平均周期为25min。仪器提取大批量有优势70min核酸提取96个标本严格按照试剂解说书进行，本实验室的经验是每批次提取完成后，提取仪喷洒核酸消灭剂，然后用纸擦拭清洁，再用75%酒精喷洒擦拭（磁棒除外），开紫外消毒半小时，按照此消毒方式能最大水平削减核酸提取环节的污染。

2.核酸扩增环节问题：建议采用中国国度卫生健康委介绍的或经由实验室验证的新型冠状病毒核酸检测试剂盒。每批次建议使用一个弱阳性质控一个阳性质控和三个阴性质控，三个阴性质控随机放置分歧位置。为提高申报