基因治疗【60页】（最新文档）.pptx

;一、基因治疗的概念;基因治疗的类型;

目的基因的选择与制备

受体细胞的培养

载体的选择

将目的基因导入靶细胞(导入方法的选择)

转导细胞的筛选和鉴定

基因治疗的安全性监测和疗效评价;二、基因治疗的基本程序

(一)目的基因的制备(方法);(二)基因导入方式(方法)的选择;(三)基因导入的病毒学方法;1.逆转录病毒载体;逆转录病毒的结构特征;如莫洛尼氏鼠白血病病毒（Mo-MLV）基因组结构：;;逆转录病毒载体的构建;逆转录病毒载体的构建(续);;如何获得高效转染、高安全性的重组逆转录病毒？;重组逆转录病毒：;

假病毒颗粒的产生并感染靶细胞

逆转录病毒载体重组逆转录病毒

(核酸部分只能是逆转录病毒载体)

;2、腺病毒载体(略)

;2)多态性脂质体;;(五)靶细胞的选择;常用的靶细胞的种类;(六)转染细胞的筛选和导入基因的鉴定;新霉素抗性选择系统

----G418筛选原理;2、导入基因的鉴定;(七)基因治疗临床试验的审批(略);2.基因置换(基因矫正);3、基因添加;4、基因干预;(二)基因干预主要有以下几种方法;反义核酸(antisensenucleicacid);1、反义RNA技术;ODN与mRNA结合后抑制后者的翻译(反义核酸技术)；;2、核酶(ribozyme)技术;最简单的核酶二级结构——锤头状结构

(hammerheadstructure)

;核酶催化部份和底物部份组成锤头结构;人工设计的核

酶

;核酶在基因治疗中的应用;RNA干涉(扰)(RNAinterference,RNAi)

(补充);RNAINTERFERENCE;3、自杀基因技术;自杀基因(suicidegene)的功能如下图所示：;;四、遗传病的基因治疗;(一)腺苷脱氨酶(ADA)缺陷病的基因治疗;ADA缺陷导致SCID的分子机制;;;2.ADA缺陷病的基因治疗研究;;;3.ADA缺陷的临床基因治疗

ADA-gene+vector（逆转录病毒）

重组分子患者TLyCIL-2刺激C分裂

导入

生长、分裂的细胞

10天

ADAgene表达

回输患儿体内

1~2月治疗一次,10.5个月后

患儿体内ADA水平达正常人的25%

;(二)血友病B的基因治疗(略)(三)家族性高胆固醇血症的基因治疗(略);(一)抑制和杀伤肿瘤细胞;自杀基因在肿瘤组织中的特异性表达;2.抑制癌基因的表达;3.恢复抑癌基因的功能;;;