基因治疗【80页】（最新文档）.pptx

基因工程研究所

;药物治疗

手术治疗

放射治疗

理疗;基因治疗;一、基因治疗的概念;概念的发展;二、基因治疗的种类;;根据基因导入的靶细胞分为两种：

1.生殖细胞基因治疗

生殖生物学问题复杂

伦理学问题

禁止应用人体

2.体细胞基因治疗：研究重点;体细胞治疗的概念;基因治疗的策略;(一)直接策略;基因修正（genecorrection）

指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正常部分。

基因替代（genereplacement）

指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致病基因。

不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。;基因打靶技术;3.基因增强（geneaugmentation）

成熟的策略

是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有的功能得以加强。;4.基因干预（geneinterference）

是采用特定的方法，导入外源基因选择性地阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。

导入抑癌基因

反义核酸技术(antisensetechnology)：

①反义RNA；②反基因技术；③核酶

RNA干扰（RNAinterference);抑癌基因疗法;反义核酸;反义RNA技术;关键性问题;受体介导的反义RNA转移;反义RNA应用前景;核酶;1981年，Cetch和Alfman首次发现了一类具有特异性剪切RNA活性的RNA分子。;核酶具有稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。

核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合并切割其他的mRNA，效率高于反义RNA。

;RNA干扰技术;慢性髓系白血病（CML）特异miRNA的克隆及功能研究;(二)间接策略

导入与致病基因无直接联系的治疗基因;1.免疫基因治疗;2.分子化疗;(1)自杀基因疗法;自杀基因;

自杀基因+病毒载体

转染

重组载体;CD自杀基因系统对T淋巴细胞作用的实验研究;提出一种用自杀基因系统控制移植物中T淋巴细胞数量及活性、从而控制GVHD和保留GVL作用的思路。大肠杆菌???嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)可以将无毒性的5-氟胞嘧啶(5-FCyt)变成细胞毒性的5-氟尿嘧啶(5-FUra),因此，我们设想将CD基因在骨髓移植前导入移植物的T淋巴细胞并在其中表达,随移植物一起输入患者后，可通过5-FCyt的剂量控制体内的T淋巴细胞的数量而减轻或消除GVHD并发挥GVL的作用。;(2)化疗保护性基因治疗;(3)药物增敏基因治疗;3.特异性细胞杀伤;特异性细胞杀伤;三、基因治疗的基本流程;（一）外源基因的选择与制备;外源基因的选择原则;（二）载体的选择与构建;逆转录病毒;逆转录病毒的基因组结构;逆转录病毒的生活史;病毒载体构建;包装细胞;Retroviralpackagingsystem;假病毒颗粒;逆转录病毒载体的特点;问题;腺病毒载体;常用的病毒载体及其基因转移的特点;(三)靶细胞的选择;靶细胞的选择;(四)基因转移;肿瘤基因治疗的基因转移系统;脂质体liposomes;(五)基因转染细胞的筛选与鉴定;(五)基因转染细胞的筛选与鉴定;(六)回输体内;四、基因治疗的应用

与展望;基因治疗的应用;遗传病的基因治疗;遗传病基因治疗的临床研究;ADA缺陷病的分子机制;1）单个核细胞的分离：使用淋巴细胞分层液分离患儿血中单个核细胞；

2）单个核细胞培养：以“CD3抗体+IL2”体外培养以刺激T细胞增殖，分化；

3）逆转录病毒载体介导外源基因（治疗基因+标志基因）转染T细胞；

4）将转染细胞回输给患儿体内。;肿瘤的基因治疗策略;肿瘤的基因治疗策略;三、调节和增强机体的免疫功能

1.细胞因子基因导入免疫细胞

2.基因修饰的树突状细胞

3.分泌免疫毒素的T淋巴细胞

4.肿瘤DNA疫苗;病毒性疾病的基因治疗;中国的基因治疗;逆转录病毒载体+FⅨcDNA

重组体

5`LTRFⅨneoSVPSO