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文献

靶标发现和确证一般流程靶标发现与确证的一般流程：1.寻找疾病相关生物分子线索：利用基因组学、蛋白质组学以及生物芯片技术获取疾病相关的生物分子信息，并进行生物信息学分析，获取线索。2.对相关的生物分子进行功能研究，以确定候选药物作用靶标。3.候选药物作用靶标，设计小分子化合物，在分子、细胞和整体动物水平上进行药理学研究。4.验证靶标的有效性。

概述潜在的细胞小分子靶标的确证在生物医学研究和药物发现中是重要的，但由于缺乏在活细胞中基于蛋白质组学的直接调查小分子与蛋白相互作用的方法，而具有挑战性。最直接的方法是使用重组蛋白与高通量筛选（HTS）结合来进行化合物筛选的生化方法。但这种方法有两个关键问题仍未得到解决

概述首先是一个固定的“诱饵”化合物的使用，这就需要重大改变原料药或候选药物的结构。第二是在蛋白捕获步骤中使用细胞裂解物而不是活细胞，这就忽略了不同蛋白质在各亚细胞器中的表达/活动/结合。因此，这并不非常适合于研究仅在高度调节的天然细胞环境中发生的真正的蛋白质-小分子的相互作用。

蛋白质组学蛋白质组一词，源于蛋白质与基因组两个词的组合，意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。很多研究采用匀浆组织制备蛋白质样品的技术路线，但其研究结论值得怀疑，因为组织匀浆后不同细胞类型的蛋白质混杂在一起，最后得到的研究数据根本无法解释蛋白质在每类细胞中的表达情况。虽然培养细胞可以得到单一类型细胞，但体外培养的细胞很难模拟体内细胞的环境，因此这样研究得出的结论也很难用于解释在体实际情况。

重组蛋白根据其定义，重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。

高通量筛选高通量筛选(Highthroughputscreening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据，在同一时间检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系，它具有微量、快速、灵敏和准确等特点。简言之就是可以通过一次实验获得大量的信息，并从中找到有价值的信息。

原位蛋白质组研究生物活性化合物的方法两个亚组的生物活性分子的化学修饰提供了相应的基于活动的探针（ABPs）或亲和探针（AfBPs）。在活细胞中孵育后，共价蛋白质探针相互作用直接被ABPs或被借助于光交联的AfBPs捕获。细胞随后裂解。接下来是通过生物正交反应共价连接叠氮化物，随后富集蛋白质并利用SDS和LC-MS/MS进行目标识别。

光交联高分子化合物光化反应的一种。化合物受光照射后发生光解作用,或者键的一部分开键时,生成的游离基等活化分子互相键合而导致高分子链形成网状结构的反应。

SDSSDS一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCl解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场