遗传性疾病的分子诊断12am.pptx

DNA;遗传性疾病分子诊断;遗传性疾病诊断策略;1.点突变的诊断;一、限制性内切酶法（RE法）;×;;;;;PCR-SSCP;2.片段性突变的检测;杜氏和贝氏肌营养不良症的基因诊断;遗传性疾病诊断策略;DNA多态（DNAPolymorphism）：

群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。

它通过孟德尔方式遗传。常用做遗传分析中的标记。;将与致病基因连锁的某种多态性标志作为遗传标志，在同一个家系成员中探查是否存在致病基因的方法即为基因连锁分析法。;常用的遗传性多态性标记有3类：;;;1Southernblot--RFLP诊断(PKU);患者为19kb片段的纯合子,说明患者缺陷的PAH

基因与19kb片段连锁

其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁，

其23kb片段与正常PAH基因连锁。

II2为23kb和19kb片段的杂合子，为表型正常的致病基因携带者。;数目变异串联重复

variablenumbertandemrepeats,VNTR;VNTR两侧酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。

DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplifiedfragmentlengthpolymorphism,Amp-FLP）;VNTR酶切，电泳后的检测结果

;PCR-VNTR检测;PCR-VNTR;成年型多囊肾病的诊断;以3`HVR为探针，与PvuII酶切后的家系有关成员的基因组DNA进行SouthernBlot

;12

12345

5.7kb

3.4kb

2.3kb

;结果分析;单核苷酸多态

SingleNucleiotidePolymorphism，SNP;遗传性疾病的主要分子机理是基因突变，因而是基因诊断的最佳适应症。;血红蛋白病

最早成功进行产前基因诊断;;×;;;

a-地中海贫血：

不同数量(1-4个)a-珠蛋白基因缺失或点突变等

aa?

14kb

BamHI

BamHIaa/aaaa/--aa/a-a-/----/--

10kb14kb

10kb

a;b-地中海贫血主要是b-珠蛋白基因点突变。

突变常不涉及限制酶识别位点

不能用限制性酶切图谱进行直接分析。

诊断方法：

RFLP连锁分析间接检测病变基因

ASO斑点印迹杂交分析直接检测病变基因点突变

DNA芯片（包括各种基因突变位点的所有探针）

可快速、简便地检出所有已知突变

;

甲型血友病（血友病A）

凝血因子VIII（FVIII）缺乏所致，

发病的分子机制是FVIII基因突变，主要为点突变或少数硷基

的缺失和插入以及第22内含子的大片段倒位。

乙型血友病（血友病B）

起因于凝血因子IX的缺乏

其分子机制是分布于整个基因各处的多种形式的突变。

诊断方法：PCR/ASO直接检测法（点突变）

PCR/RFLP连锁分析