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DNA提取
样品收集：取新鲜植物叶片（大约250mg）于冻存管中，向管中加
入1大4小的钢珠，液氮中冷冻5分钟，之后取出剧烈振摇，待样
品被研细后用磁铁将钢珠吸出，样品冻存于-80℃，钢珠用无水乙醇
洗涤后用于下一次样品收集。
溶液配制：
溶液A：100mMTris
100nMNaCl
10mMEDTA
1%十二烷基肌氨酸钠
0.1%NaSO3
2%聚乙烯吡咯烷酮
调节PH至8.5
溶液B；酚-氯仿-异戊醇（25：24：1）
溶液C：硅胶基质
溶液D：3MNaAc（pH4.8）
溶液E：异丙醇
溶液F：70％的乙醇
溶液G：含有40ug/ml的TE缓冲液
TE缓冲液(10mMTris,1mMEDTA,[pH8])
步骤：
1、取出液氮中冻存的样品于2ml离心管中，加入700ul的溶液A，
涡旋振荡1分钟
2、加入700ul溶液B，800转/分振荡器震荡10分钟。
3、加入500ul溶液C，混匀后3200g离心10分钟。
4、上层相液体移入1.5ml离心管，加入60ul溶液D和600ul溶液E，
涡旋振荡2分钟。
5、3200g离心2分钟。
6、上清倒出，用500ul溶液F洗涤DNA。
7、离心弃洗液后，干燥DNA。
8、加入60ul溶液G后于4℃过夜溶解DNA。
总RNA提取
准备工作（试剂配置和器材准备）
实验所用的研臼,杵,小药勺,试剂瓶,量筒，剪刀等与实验材料
有接触的器皿都要在0.1%的DEPC水中浸泡24h，用锡纸包
裹于180℃（烘箱）高温灭菌2h或160℃高温灭菌4h后备用；
塑料制品如进口tip头、eppendorf管(1.5ml,0.5ml)高压灭
菌,烘干后备用(放置时间不宜超过一周)。RNase-freewater
的制备如下：在蒸馏水中加入0.1%体积的DEPC原液（如
1000ml蒸馏水中加1mlDEPC原液）,用塑料膜封口后，充
分混匀,静置过夜,高压灭菌.(注意:DEPC有强诱癌作用,操作
时须谨慎,加了DEPC的水放通风橱中,避免吸入气体)
三、实验操作步骤
1）称取0.5g植物材料,用液氮速冻后，迅速研磨成细粉,分装
于两个1.5ml的eppendorf离心管中
注意：动作尽量迅速,避免RNA降解；另外，要尽量地选用幼
嫩的植物材料，因其RNA的含量相对于老材料要丰富。
2）加入1mlTRIzol，用力摇动使混合均匀,室温下放置5min
（混合液呈棕红色，可分成三大层：上层水相中含有RNA，
中层含蛋白和下层有机相为材料残渣及DNA等）
注意：样品的量不要超过TRIzol体积的10%，过多反而会降
低RNA的得率。
3）（此步可根据实际情况选择做还是不做）当样品中蛋白、
脂肪及多糖含量较高时,离心（4℃,12,000g,10min）,小心
将上清液吸入1.5ml的eppendorf离心管中
注意：RNA的抽提过程中的所有离心操作皆在4℃的冷冻离
心机上进行（下同）
4）每管加0.2ml氯仿,用力振荡15sec,室温放置2-3min,离心
(4℃,12,000g,15min)
5）将上清液(约600ul)吸入1.5ml的新eppendorf离心管中,
加等体积异丙醇,颠倒混匀（动作要缓和）,-20℃冰箱中放置
30min（过夜则沉淀更加充分）
6）离心（4℃,12,000g,15min
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