沉默信息调节因子1去乙酰化NF-κBp65减轻糖基化终产物诱导的RAW264.7.pdfVIP

沉默信息调节因子１去乙酰化ＮＦ—ＫＢｐ６５减轻糖基化

终产物诱导的ＲＡＷ２６４．７细胞炎症反应

李康兰罗健东张贵平张根水何艳华

摘要目的：观察沉默信息调节因子１（ＳＩＲＴ１）对晚期糖基化终产物诱导的ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＦ—ＫＢ乙

酰化水平及炎症的影响。方法：体外培养ＲＡＷ２６４．７细胞，用含不同浓度梯度（５０、１００、２００、４００ｍｇ／Ｌ）的

糖基化终产物刺激ＲＡＷ２６４．７细胞２４ｈ及分别以白藜芦醇（１００ｔｘｍｏｌ／Ｌ）及Ｅｘ５２７（１０ｔｘｍｏｌ／Ｌ）预处理

ＲＡＷ２６４．７细胞３０ｍｉｎ后，再给予ＡＧＥｓ（４００ｍｇ／！）作用２４ｈ．采用ＥＬＩＳＡ的方法检测ＲＡＷ２６４．７细胞的

炎症因子ＩＬ一１ｐ及ＴＮＦ一的产生和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测ＳＩＲＴ１及乙酰化ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白的表达结果：糖

基化终产物组ＲＡＷ２６４．７细胞乙酰化ＮＦ一￣Ｂｐ６５蛋白的表达及炎症因子ＩＬ．１Ｂ及ＴＮＦ一的水平显著高于对

照组（Ｐ＜０．０５），ＳＩＲＴ１蛋白的表达明显低于对照组（尸＜０．０５），以上指标均呈剂量依赖性。白藜芦醇具有逆

转糖基化终产物的作用，下调乙酰化ＮＦ－ｎＢｐ６５蛋白的表达，降低炎症因子的产生，与糖基化终产物组比较差

异具有显著性（Ｐ＜０．０５）；而抑制ＳＩＲＴＩ使糖基化终产物诱导的乙酰化ＮＦ—ＫＢｐ６５水平、ＩＬ．１Ｂ及ＴＮＦ．仅蛋

白水平升高。结论：晚期糖基化终产物降低ＳＩＲＴ１蛋白的表达诱导炎症因子的产生，白藜芦醇激活ＳＩＲＴ１使

ＮＦ—ＫＢｐ６５去乙酰化从而抑制ＲＡＷ２６４．７细胞炎症反应

关键词白藜芦醇；晚期糖基化终产物；炎症；沉默信息调节因子１；小鼠巨噬细胞ＲＡＷ２６４．７细胞

糖尿病是国际关注的公众健康问题，随着社

１材料与方法

会的发展，患病率逐年增加，糖尿病血管病变是造

成致残致死的重要原因［１－２Ｊ。近年的研究表明，单核１．１材料与试剂小鼠ＲＡＷ２６４．７细胞株购自

巨噬细胞介导的慢性炎症是糖尿病血管病变持中国科学院上海细胞库。白藜芦醇，ＥＸ一５２７，ＳＩＲＴ１

续发展的关键因素［３－ｓ］。核转录因子一ＫＢ（ｎｕｃｌｅａｒ小鼠单克隆抗体购自Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公司：ＡＧＥｓ购

ｆａｃｔｏｒ．ＫＢ，ＮＦ．ＫＢ）对炎症有重要的介导作用，但调自北京博奥森公司；ＲＰＭＩ１６４０培养基、双抗和胰酶

控ＮＦ．ＫＢ的分子机制仍未阐明。沉默信息调节因购自ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司，胎牛血清购自ＢＩ公司，Ａｃｅｔｙ１．

子ｌ（ｓｉｌｅｎｔｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒ１．ＳＩＲＴ１）是一种依ＮＦ．ＫＢｐ６５、ＮＦ—ＫＢｐ６５和６一ａｃｔｉｎ抗体购自Ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ

赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白去乙酰化酶．公司，小鼠ＩＬ．１ｐ，ＴＮＦ一仅ＥＬＩＳＡ试剂盒购自联科生

通过对组蛋白及转录因子的去乙酰化修饰，与衰物科技有限公司。

老、肿瘤和代谢性疾病等密切相关。研究表明。１．２方法

ＳＩＲＴ１可使ＮＦ．ＫＢｐ６５去乙酰化．减少炎症因子的１．２．１细胞培养在３７℃，５％ＣＯ条件下，用含

产生ｌ＿６。高血糖引起体内多种蛋白质非酶糖基化ｌ０％胎牛血清、青霉素（１×１０／Ｌ）及链霉素（１００

及由此形成的晚期糖基化终末产物（ａｄｖａｎｃｅｄｍｇ／Ｌ）的ＲＰＭ１６４０培养Ｉ液传代培养，实验用处于

ｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｅｔｓ，ＡＧＥｓ）在糖尿病血管病变的对数生长期细胞。

发生机制中也起重要作用。但ＡＧＥｓ诱导炎症的１．２．２实验分组待细胞生长近融合，换无血清

机制尚未完全阐明，是否单核巨噬细胞ＳＩＲＴ１一ＮＦ—培养过夜。分组给药：（１）用不同浓度（０、５０、１００、

ＫＢ