药学专业知识一药物分析：薄层色谱法.pdfVIP

薄层色谱法

薄层色谱法(thinlayerchromatography，TLC)系将供试品溶液点

样于涂布有固定相的薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜

的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较，主要用于药品的鉴别或杂

质检查。

考点1：薄层色谱法的操作方法

制板——点样——展开——定位——结果

制版：将固定相涂布在薄板上

常用固定相：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺

涂布方法：研磨——除气泡——涂布——晾干——活化

活化方法：在ll0℃加热30分钟(目的：使硅胶吸附力增强)

点样：将样品点在薄层板上

点样要求：一般为圆点圆点，点样基线距底边2cm，样点直径为2～

4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～

2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。

展开剂：可以是单一溶剂，可以用是不同试剂按一定比例组成的混

合溶剂。浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm(切勿将样品点浸

入展开剂中)

定位：记录展开剂前沿，及各斑点的位置

结果检视：

光学法：有色斑点、荧光淬灭、发射荧光：254nm，365nm

化学法：显色剂显色

考点2：色谱系统适用性试验

包括：检测灵敏度、比移植、分离效能

1.检测灵敏度

采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定

的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰

的斑点。

2.比移植

实践中，Rf值的范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。

3.分离效能

分离效能以分离度表示，分离度(R)系指两个相邻斑点中心距离与

两斑点的平均宽度(直径)的比值。

R=2d/(W1+W2)

考点3：薄层色谱的应用

1.定性分析：供试品、对照品点在同一薄层板上→展开显色后→供

试品、对照品比移值一致→可认为供试品与对照品是同一物质。

2.纯度检查：

对照法：供试品、杂质、对照品点在同一薄层板上→…→杂质斑点

颜色与对照品斑点比较，不得更深→可认为未超过规定的含杂质限量。

自身稀释对照法：以供试品溶液的稀溶液作为对照液，方法同上

判断：

A、供试品所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深

B、规定供试品杂质斑点的个数

硅胶薄层板使用前在110℃加热30分钟，这一过程称为

A.去活化

B.活化

C.再生

D.饱和

E.平衡

『正确答案』B

关于薄层色谱的点样与展开，以下叙述正确的是

A.点样的样点必须为圆点

B.点样基线距底边越近越好，一般小于1.Ocm

C.样点直径一般为2～4cm

D.每块板只能点1个样点，以防斑点间干扰

E.展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm

『正确答案』E

多项选择题

薄层色谱系统适用性试验的内容有

A.检测灵敏度

B.精密度

C.比移值

D.拖尾因子

E.分离效能

『正确答案』ACE

斑点定位法常用的显色剂有

A.碘

B.硫酸溶液

C.荧光黄溶液

D.茚三酮

E.四氮唑盐

『正确答案』ABCD

『答案解析』显色剂有通用型和专用型两种。通用型显色剂有碘、

硫酸溶液、荧光黄溶液等，可使许多物质显色。如碘可使生物碱、氨基

酸衍生物、肽类、脂类及皂苷等显色;专用显色剂可使某个或某类化合

物显色，如茚三酮可使氨基酸显色。显色方法有直接喷雾法、浸渍法和

压板法等。