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本科学生综合性实验报告
姓名李艳学号1443204000124
学院生命科学学院专业、班级14级生物科学B班
实验课程名称分子生物学实验
教师及职称吴暇玉（讲师）
开课学期2016至2017学年上学期
云南师范大学教务处编印
实验室睿智楼3幢422实验时间2016年9、10月
实验名称质粒DNA的提取及酶切、琼脂糖凝胶电泳
一、实验目的
Aftertheexperimentisfinished,studentsshouldbeabletoisolate
plasmidDNAbythealkaline-detergentmethod.
Aftertheexperimentisfinished,studentsshouldknowhowtomake
anagarosegel.
掌握碱去垢剂法提取质粒DNA的方法。
掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。
二、实验仪器及试剂
Ⅰ.Instruments
1.Constanttemperatureincubator（恒温培养箱）
2.Constanttemperatureshakingtable（恒温摇床）
3.Highspeedcentrifuge（高速离心机）
4.Vortexmixer（涡旋振荡器）
5.CleanBenches（超净工作台）
6.Autoclave（高压灭菌锅）
7.Pipettes（微量加样器）
Ⅱ.Reagents
1.SolutionⅠ（溶液Ⅰ）
(25mMTris-HClpH8.0,50mMglucose,10mMEDTA)
(25mMTris·HCl（pH8.0）,50mM葡萄糖,10mMEDTA)
2.SolutionⅡ（溶液Ⅱ）
(0.4MNaOH,2.0%SDS,madefreshjustpriortouse)
(0.4MNaOH,2%SDS[新鲜配制,等体积混和])
3.SolutionⅢ（溶液Ⅲ）
(5Mpotassiumacetate,aceticacid)storedonice.
(5MKAC:60ml,冰醋酸:11.5ml,水:28.5ml)
4.TEbuffercontaining10μg/mlRNaseA(preheatedto80℃for10
mininactivateDNase)
5.70%ethanol（乙醇）.
6.Phenol:chloroform[平衡酚:氯仿](1:1)
7.LB培养基：
胰化蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl10g
pH7.0
摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/L氢氧化钠（约0.2ml）
调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1000ml，在1.034×105Pa
高压蒸汽灭菌20min。
8.菌种：含质粒的大肠杆菌
Ⅲ
1.Agarose.
2.TBE[5×stocksolution(1liter):54gTrisbase,27.5gboricacid,20ml
0.5MEDTA,pH8.0].
3.10×loadingbuffer:0.25%bromophenolblue,40%sucroseinwater.
4.Equipment:
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