DB53T 1276-2024 山药茎尖组织培养种苗繁育技术规程.docxVIP

ICS65.020.20CCSB21

DB53

云南省地方标准

DB53/T1276—2024

山药茎尖组织培养种苗繁育技术规程

2024-05-08发布2024-08-08实施

云南省市场监督管理局发布

DB53/T1276—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由云南农业大学提出。

本文件由云南省农业标准化技术委员会(YNTC07)归口。

本文件起草单位：云南农业大学、富源县经济作物技术推广站、富源县谷子地种植农民专业合作社。

本文件主要起草人：龙雯虹、施令祥、段延碧、徐升胜、陈佩、兰平秀、王仕玉、郑玉屏、耿辉、程园、敖纯。

工

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DB53/T1276—2024

山药茎尖组织培养种苗繁育技术规程

1范围

本文件规定了山药(Dioscoreaopposita)茎尖组织培养与脱毒试管苗繁育的设备设施、化学试剂、培

养基、茎尖组织培养、病毒检验、脱毒苗继代增殖培养、生根培养、苗炼苗等技术要求。本文件适用于山药茎尖组织培养及脱毒试管苗繁育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求GB/T22278良好实验室规范原则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

茎尖组织培养Shoottipculture

简称茎尖培养，切取茎尖分生组织，进行离体培养的过程。

3.2

茎尖组培苗Plantletsfromshoottipculture

切取茎尖分生组织进行离体培养后获得的组培苗，在本文件中特指经检测不携带山药斑驳病毒 (YMOV)、山药温和花叶病毒(YMMV)、日本山药花叶病毒(JYMV)和山药褪绿坏死病毒(YCNV)等病毒病的山药组培苗。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

MS:MS培养基(MurashigeSkoogmedium)AC:活性炭(Activatedcarbon)

6-BA:6-苄基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)NAA:萘乙酸(Naphthylaceticacid)

RNA:核糖核酸(Ribonucleicacid)

cDNA:互补脱氧核糖核酸(ComplementaryDNA)

PCR:聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction)

5实验室、仪器设备与试剂

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5.1实验室

符合GB19489和GB/T22278的规定。

5.2仪器设备

高压灭菌锅、分析天平、空调、超净工作台、解剖镜、高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、超纯水机、接种针、手术刀、培养架、光温监控装置、紫外透射仪等。

5.3试剂

山药茎尖组织培养种苗快繁常用化学试剂类别和等级见附录A表A.1。病毒检测常用化学试剂见附录A表A.2。

6培养基

6.1培养基配方

6.1.1诱导芽萌发培养基

MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg/L十蔗糖30g/l+琼脂7g/L±AC0.12g/L。

6.1.2继代增殖培养基

MS+6-BA1mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。

6.1.3生根培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。

6.1.3生根培养基

6.2培养基配制

6.2.1诱导芽萌发培养基配制

各个成分按6.1.1中的配方量取，加蒸馏水定容，用1mol/L的NaOH或HCl将培养基的pH值调到5.8~6.0后分装到组培瓶中(培养基厚度为1cm)

6.2.2继代增殖培养基配制

培养基的各个成分按6.1.2中的配方量取，加蒸馏水定容，用1mol/L的NaOH或HCl将培养基的pH值调至5.8～6.0后分装到组培瓶中(培养基厚度为1cm)。

6.2.3生根培养基配制

培养基的各个成分按6.1.3中的配方量取，加蒸馏水定容，用1mol/L的N