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食品中沙门氏菌的快速检测测试片法
1范围
本文件规定了沙门氏菌(Salmonella)的快速检测-测试片法。
本文件适用于食品及加工环境涂抹样品中沙门氏菌的快速检验。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验
GB19489实验室生物安全通用要求
3设备和材料
3.1电子天平:感量0.001g。
3.2拍击式均质器。
3.3振荡器。
3.4恒温培养箱:36℃±1℃、42℃±1℃。
3.5无菌锥形瓶:容量500mL、250mL。
3.6无菌量筒:容量50mL。
3.7无菌均质杯、无菌均质袋。
3.8无菌吸管:1mL(0.01mL刻度)、10mL(0.1mL刻度)或移液器及吸头(0.1mL~1mL)。
3.9无菌试管:10mm×75mm。
3.10pH计或精密pH试纸:精密度0.1。
3.11无菌接种环:10μL(直径约3mm)、1μL以及接种针。
3.12高压蒸汽灭菌器。
3.13涡旋混合器。
4培养基和试剂
4.1沙门氏菌增菌液:见附录A.1。
4.2氯化镁孔雀绿大豆胨(RVS)增菌液:见附录A.2。
4.3HandyPlate?沙门氏菌测试片。
4.4HandyPlate?沙门氏菌确认反应片。
4.5无菌磷酸盐缓冲液,见附录A.3。
4.6无菌生理盐水,见附录A.4。
2
4.71mol/LNaOH溶液,见附录A.5。
4.81mol/LHCl溶液,见附录A.6。
4.9EHK?HK-N-PBS一次性采样管。
5检验程序
25g(mL)食品样品+225mL沙门氏菌增菌液,
25g(mL)食品样品+225mL沙门氏菌增菌液,均质
加工环境涂抹样品
一次性采样管擦拭表面36℃±1℃,18h~24h
一次性采样管擦拭表面
yy微生物含量较低的样品(≤10
y
y
微生物含量较低的样品
(≤10CFU/g)
涡旋混合以充分释放微生物
微生物含量较高的样品
(10CFU/g)
0.1mL增菌液+10mLRVS增菌液
10mL缓冲液+225mL沙门氏菌增菌液,均质18h~24h
10mL缓冲液+225mL沙门氏菌增菌液,均质
18h~24h
y
沙门氏菌测试片
36℃±1℃,24h±2h
非沙门氏菌yyy
非沙门氏菌
y
y
y
可疑菌落
沙门氏菌确认反应片
沙门氏菌36℃±1℃,4h~5h
沙门氏菌
非沙门氏菌
报告
图1沙门氏菌测试片法检验程序
6操作步骤
6.1增菌
6.1.1无菌操作称取25g(mL)样品,置于盛有225mL沙门氏菌增菌液的无菌均质杯或其他合适容器内,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225mL沙门氏菌增菌液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需调整pH,用1mol/LNaOH溶液或1mol/LHCl溶液调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶或其他合适容器内(如无菌均质杯本身具有无孔盖,可不转移样品)。如使用无菌均质袋,可直接进
行培养,于36℃±1℃培养18h~24h。
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6.1.2对于乳粉,无菌操作称取25g样品,缓缓倾倒在广口瓶或无菌均质袋内225mL沙门氏菌增菌液的表面,勿调节pH,也暂不混匀,室温静置1h后再混匀,置于36℃±1℃培养18h~24h。
6.1.3冷冻样品如需解冻,取样前在45℃以下解冻不超过15min,或在2℃~5℃冰箱内缓慢解冻不超过18h。
6.1.4对于微生物含量较高的样品(104CFU/g)(如生的或未加工),轻轻摇动上述培养过的沙门氏菌增菌液,移取0.1mL,转种于10mLRVS增菌液内
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