高中生物学人教版2019：1-2 微生物的培养技术及应用（微生物的选择培养和计数）上交版本.pptx

1.2微生物的培养技术及应用(第三课时——探究抗生素对肠道益生菌的影响

学科：生物(人教版)

年级：高二年级

课程标准：

1.运用选择培养基设计实验方案，说明通过调整培养基的配方可有目的地培

养某种微生物。

2.运用稀释涂布平板法测定益生菌的数量，分析评价实验结果。

目录：

情境任务二运用稀释涂布平板法

情境任务三结果分析与评价

情境任务一设计实验方案

情境任务一：

世界卫生组织调查显示，中国住院患者抗生素药物使用率高达80%,其中使用广谱抗生素和联合使用两种以上抗生素的占58%,远远高于30%的国际水平。

实验表明，现在使用的抗生素中，几乎所有药物在其治疗菌种范围内都存在大量适应性增强的耐药菌。数据显示，中国每年有超过8万人因耐药菌而死亡。

在抗生素的使用下，是否能够筛选耐药性菌?

提出问题

思考1:初步观察，通过菌落特征，平板上有几种菌落?

实验材料：

枯草杆菌

肠球菌

(牛肉膏蛋白胨培养基)

牛肉膏

3.0g

蛋白胨

10.0g

NaCI

5.0g

琼脂

15.0g

蒸馏水

定容到1000ml

eg:

1.利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可

以分离尿素分解菌。

2.在培养基中加入分离对象能够抵抗的某种抗

菌物质。

思考2:以下培养基是一个选择培养基吗?

思考3:如果只用该培养基，能否证明其具有选择作用?

作出假设

在抗生素的使用下，筛选出耐药性菌

自变量

培养基中是否含有头孢菌素

实验设计

对照组

实验组

含无菌水的牛肉膏蛋白胨培养基+少量菌液

含头孢菌素的牛肉膏蛋白胨培养基+等量菌液

预期实验现象

(圆点表示菌

落)

预期实验结果

实验组的菌落数目少于对照组的菌落数目

学生活动①:请在学案上设计实验方案，探究抗生素的使用下，是否筛选了耐药性菌。

李兰娟团队抗击禽流感

情境任务二：

据视频可知，太大剂量抗生素对肠道益生菌误杀程度很大。医疗人员

请你运用稀释涂布平板法，尝试计数，说明头孢菌素对益生菌的抑制作用。

怎么得出某种益生菌的比值异常?将肠道益生菌进行分离和计数

情境任务二(一)梯度稀释

思考：1.该过程应该在什么环境下进行?

2.取1mL菌液加入无菌水后，如何充分混匀?3.整个过程如何防止杂菌污染?

注意：移液枪需要经过灭菌，试管口和移液枪应在酒精灯火焰处附近

9mL

稀释液

9mL

稀释液

9mL

稀释液

9mL

稀释液

9mL

稀释液

9mL

稀释液

菌液

101

用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。

(二)涂布平板

取0.1L菌液滴加到培养基表面。

3将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。

将平板翻转，倒置培养。

将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

菌液

翻转

(二)涂布平板

观察视频中同学涂布时，在无菌技术操作的要求上，关键且正确的步骤，请补充不足之处

关键的无菌技术：

1.手部、桌面用酒精棉球

擦拭消毒。

2.操作过程在酒精灯火焰

附近

3.试管口通过火焰

4.涂布器灼烧灭菌、冷却

5.涂布器使用后灼烧或浸

泡在酒精溶液除残留菌液

6.倒置平板

无菌水

减少误差，保证实验

结果更准确

注意：1.同一稀释度下至少涂布3个平板。

2.选取菌落数在30~300的平板进行计数。

无菌水

稀释

度

时间

1×104

1×105

1×106

1

2

3

平均值

1

2

3

平均值

1

2

3

平均值

每个平板的菌落数

24

h

48

h

每隔24h观察统计一次，选取菌落数稳定时的记录作为结果。

最好以表格的形式将不同菌落的特征(如形状、大小和颜色等)记录。

求出平均值，并根据对应的稀释度进行计算!

情境任务三：结果分析与评价

1.以稀释106倍菌液接种的这个平板为例，我们应如何计数?

原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，

来源于样品稀释液中的一个活菌。

活菌计数法：

菌落数 菌液体积

×稀释倍数(个/mL)

2.如何分析培养基中是否有杂菌污染?选择培养基是否筛选出一些耐药性

菌落?10105107无菌水

▲不含头孢菌素的完全培养基

▲含头孢菌素的完全培养基

实验结论：抗生素对肠道益生菌是有明显的抑制作用，会误杀大量益生菌，也会筛选留下了耐药性菌，导致微生物生态失衡。

实验组：平均数：63(0)

肠球菌

实验组2

对照组3

实验组3

微生物益生菌I纯培养

的数量

延伸思考：