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hplc,实验报告(共9篇)

HPLC实验报告

水体中雌激素的高效液相色谱法分析

李甜甜指导老师：凌婉婷

1前言

目前,环境内分泌干扰物(endocrinedisruptingchemicals,EDCs)

被列为继臭氧层空洞和地球变暖之后的又一新的环境污染问题,

成为当前国际上研究的热点。至今所报道的各种内分泌干扰物中,

雌性天然激素及其合成激素被认为是最重要的干扰物之一。这些

外源性化学物进入体内后通过和内源性雌激素相同的作用机制

(主要是核受体蛋白介导作用)干扰内分泌系统而产生一系列的

不良作用,包括致癌、损伤生殖功能导致神经系统和免疫系统异

常等。

环境中的雌激素主要是由人类和动物的新陈代谢而产生的，随

着尿和粪便等排泄物而进入废水中，经过污水处理厂处理后进入

到自然水体中，并在城市水系统中的固液相之间进行迁移和转化。

再者，由于激素类药物在人类日常生活和养殖业中被大量使用，

不同种类的雌激素因此会进入城市污水管网，经污水处理厂处理

后，排放进入环境。EDCs是城市水循环过程中长期存在的一类典

型污染物，虽然其含量较低，但是在极低的浓度(ng·L-1)水平下

就能造成动物内分泌紊乱、雌性化、发育不良以及畸形化等不良

影响，而且有可能和水体中残留的其他雌激素类物质发生协同作

用,因此这类物质对生态环境潜在的危害性是不可忽视的。同时

由于EDCs的亲脂和难降解特性，在城市水循环的过程中会逐渐

积累，威胁到城市居民的身体健康，对生态环境存在潜在的危害

性，已经成为城市环境保护的核心问题，急需针对城市水体中的

EDCs开展基础研究工作。因此在环境中建立一套科学、完善、高

效的雌激素类物质检测方法是十分必要的。

近年来，随着色谱、质谱及色谱-质谱联用技术等的快速发展，

微量雌激素类污染物的检测技术也随之有较快的发展。目前测定

EDCs的方法有GC-MS法、HPLC法,荧光光度法,酶联免疫分

析法(ELISA),极谱法等。其中GC-MS和HPLC是比较常用的方法。

GC-MS法需对样品进行酯化处理,操作繁琐,重复性差。本文采

用固相萃取(SPE)浓缩净化技术,通过高效液相色谱(HPLC)分离,

荧光检测器进行定性定量分析,建立了快捷、便利、有效的对水

中内分泌干扰物EE2的测定方法,并可在污水监测中得到应用。

2实验材料

2.1仪器与试剂

LC-20A高效液相色谱仪，RF-10AXL荧光检测器。色谱柱：Inertsil

ODS-SP-C18（150mm×4.6mm,5μm）。固相萃取仪（HP-6019-12

SPE），圆周形氮气吹干仪，固相萃取柱（6mL）。

炔雌醇（2μg/mL,EE2），实验用水（超纯水），甲醇、乙腈均为

HPLC级试剂。C18，玻璃棉。

2.2标准溶液及模拟水样的配制

分别取2μg/mLEE20.25mL，0.5mL，1mL，2mL，5mL，7.5mL

于棕色容量瓶中，并用甲醇稀释定容至10ml，摇匀，配制成不同

浓度的标准溶液，保存待用。

取2μg/mLEE20.5mL于容量瓶中，用超纯水定容至100mL，摇

匀，配制模拟水样，保存待用。

2.3C18SPE柱的制作

订制6ml固相萃取玻璃柱管，在柱管底部填入一定量的玻璃棉，

称取0.2gC18填料加入柱管中，轻轻敲打柱身使其均匀，将填料

填平、压实，上层再覆盖一层玻璃棉，再以清洁的玻璃棒按压使

其装填紧密，保存待用。

2.4色谱条件

色谱柱：InertsilODS-SP-C18（150mm×4.6mm,5μm）；流动相

为甲醇/乙腈/水（体积比为25:30:45）；流速：1.0mL/min；柱温：

40℃；进样量：20μL；荧光检测器波长：激发波长为280nm，发

射波长为310nm。

2.5样品的前处理

将配制好的100mL模拟水样以约为5~8mL/min的流速通过已分

别用5.00mL甲醇和5.00mL超纯水活化的C18SPE柱，用5.00mL

超纯水淋洗柱体并继续抽吸3.0min，淋洗后的萃取柱用10.00mL

甲醇洗脱，洗脱液收集至小试管中。将小试管置于40℃的恒温水

浴并用氮吹仪缓慢吹干，然后加入50%甲醇水溶液将附着物重新

溶解至2.00mL，通过0.22