SDS-PAGE试剂配方完整版.doc

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SDS电泳所用溶液:

30%聚丙烯酰胺溶液(100mL)

丙烯酰胺(Arc)29g

N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis)1g

用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃

丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

5×Tris-甘氨酸缓冲液(1L)

Tris碱15.1g

甘氨酸(电泳级)94g

10%SDS50mL

使用时稀释5倍使用

2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)

0.5mol/LTris-Cl(pH6.8)2mL

10%(W/V)SDS4mL

甘油2mL

β-巯基乙醇1.0mL

(DTT(二硫苏糖醇)0.31

溴酚兰0.0

双蒸水0.5mL

室温存放备用

考马斯亮蓝染色液

考马斯亮蓝R-250(G-250)1.0g

甲醇450mL

冰醋酸100mL

ddH2O450mL

0.2g考马斯亮蓝R250+84mL95%乙醇+20mL冰醋酸,定容至200mL,过滤备用

考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好,但有毒性)

甲醇100mL

冰醋酸100mL

ddH2O800mL

医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)

SDS所需溶液:

A液——30%丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

B液——1.5mol/LTris·HCl,pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱,溶于80mL(40mL)去离子水中,加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8,定容至100mL(50mL)。

C液——1.5mol/LTris·HCl,pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱,溶于80mL(40mL)去离子水中,加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8,定容至100mL(50mL)。

D液——10%SDS:10g(2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶。

E液——10%过硫酸铵:5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中;现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。

F液——TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,室温保存。

表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液

成分

配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/mL

5

10

15

20

25

30

40

50

10%胶

1.9

4.0

5.9

7.9

9.9

11.9

15.9

19.8

30%丙烯酰胺混合液

1.7

3.3

5.0

6.7

8.3

10.0

13.3

16.7

1.5mol/LTris(pH8.8)

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10.0

12.5

10%SDS

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

10%过硫酸铵

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.4

0.5

TEMED

0.002

0.004

0.006

0.008

0.01

0.012

0.016

0.02

12%胶

1.6

3.3

4.9

6.6

8.2

9.9

13.2

16.5

30%丙烯酰胺混合液

2.0

4.0

6.0

8.0

10.0

12.0

16.0

20.0

1.5mol/LTris(pH8.8)

1.3

2.5

3.8

5.0

6.3

7.5

10.0

12.

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