- 1、本文档共3页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
SDS电泳所用溶液:
30%聚丙烯酰胺溶液(100mL)
丙烯酰胺(Arc)29g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis)1g
用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃
丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。
5×Tris-甘氨酸缓冲液(1L)
Tris碱15.1g
甘氨酸(电泳级)94g
10%SDS50mL
使用时稀释5倍使用
2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)
0.5mol/LTris-Cl(pH6.8)2mL
10%(W/V)SDS4mL
甘油2mL
β-巯基乙醇1.0mL
(DTT(二硫苏糖醇)0.31
溴酚兰0.0
双蒸水0.5mL
室温存放备用
考马斯亮蓝染色液
考马斯亮蓝R-250(G-250)1.0g
甲醇450mL
冰醋酸100mL
ddH2O450mL
0.2g考马斯亮蓝R250+84mL95%乙醇+20mL冰醋酸,定容至200mL,过滤备用
考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好,但有毒性)
甲醇100mL
冰醋酸100mL
ddH2O800mL
医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)
SDS所需溶液:
A液——30%丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。
B液——1.5mol/LTris·HCl,pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱,溶于80mL(40mL)去离子水中,加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8,定容至100mL(50mL)。
C液——1.5mol/LTris·HCl,pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱,溶于80mL(40mL)去离子水中,加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8,定容至100mL(50mL)。
D液——10%SDS:10g(2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶。
E液——10%过硫酸铵:5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中;现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。
F液——TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,室温保存。
表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
成分
配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/mL
5
10
15
20
25
30
40
50
10%胶
水
1.9
4.0
5.9
7.9
9.9
11.9
15.9
19.8
30%丙烯酰胺混合液
1.7
3.3
5.0
6.7
8.3
10.0
13.3
16.7
1.5mol/LTris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
12%胶
水
1.6
3.3
4.9
6.6
8.2
9.9
13.2
16.5
30%丙烯酰胺混合液
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
12.0
16.0
20.0
1.5mol/LTris(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.
文档评论(0)