免疫技术发展technology-chineseecl.pptx

1 E ? Electro C ? Chemo L ? Luminescence I ? Immuno A ? AssayECL(IA)Technology

2免疫技术的发展1960’s1970’~1980’s1990’s末！×

3电化学发光免疫测定系统的原理和主要技术最先进的电化学发光检测原理独特的磁性微粒子固相载体技术专利的链霉亲和素－生物素间接包被技术

4电化学发光底物-三联吡啶钌N羟基琥珀酰胺(NHS)酯

5独特的磁性微粒子固相载体技术磁性微粒子直径2.8um1、包被面积大2、粒子小，悬液类似液相3、磁吸引分离方便

6专利的链霉亲和素－生物素间接包被技术

7? 测量池? 抗原/抗体? 生物素? 亲和素包被的磁性微粒子? ProCellMsolution (TPA–三丙胺)? CleanCellMsolution(KOH-清洗液)? 电压? 铂金电极? 磁铁? 光电倍增管最重要的组成部分

8夹心法 ?大分子抗原测定 e.g.TSH,CA15-3II–assays竞争法 ?小分子抗原测定 e.g.T4,FolateII-assays 检测原理

9 夹心法?测定大分子抗原测定成正比：信号低=浓度低信号高=浓度高 e.g：TSH,CA15-3II–assays

10 竞争法?测定小分子抗原?测定成反比：信号低=浓度高信号高=浓度低 e.g：T4,FolateII–assays

11 基本原理

12 测量池? 系统的核心部分就是ECL的流动测量池? 测量池中进行3个反应步骤: ? 结合相/游离相的分离 ? ECL反应 ? 释放微粒子并清洗测量池

13 测量池? 结合相/游离相的分离 ? 吸入包被了抗原抗体复合物的微粒子 ? 激活磁铁

14 测量池?结合相/游离相的分离?通过电极上的磁铁捕获抗原抗体复合物?吸入TPA-ProCell冲洗工作电极上的微粒?TPA-ProCell将多余的试剂和物质冲洗干净

15 反应时相－基础状态?ECL反应?钌标记物和TPA加入反应中?无电压时，两者保持稳定?加载电压后产生电场?三联吡啶钌和TPA在电极表面发生ECL反应反应时相－钌的激发

16 ECL信号产生?ECL反应?启动ECL?发射出的光在短时间内(0.20-0.60sec.)达到峰值?光电倍增管检测到ECL信号并转换成电子信号?相应的信号值用于计算出结果?每个测试循环需要42秒:?前处理 ~2秒?磁珠捕获/结合、游离相分离 ~22秒为避免干扰，测定开始前磁铁不被激活?测定 ~2秒?清洗 ~14秒?再次处理 ~2秒

17 测量池?释放微粒子并清洗测量池?测量池中吸入清洗液?将微粒子从电极上冲洗掉?吸入TPA-ProCell?冲洗测量池表面?测量池可进行下一次的测定

18 电化学发光技术的优点? 不使用同位素? 液体试剂，非常稳定 (上机20°C可稳定最多12周)? 孵育时间短? 测量范围宽广 (减少稀释及其重做)? 敏感度高