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生物学实验常用技术

一、分子方面

1、基因工程2、蛋白质工程

1)PCR1)蛋白收集

(PolymeraseChainReaction)(蛋白裂解液+PMSF;

(二楼PCR仪器全部会用)1×Loading裂解(推荐))

2)RT-PCR;Q-PCR2)SDS(电泳胶的配制)

3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收2)考马斯亮蓝染色,银染

4)酶切/链接3)Westernblot

5)转化4)蛋白定量常用的方法及原理,

6)固体/液体LB培养基配制以及熟练操作Bradford法蛋

(高压蒸汽灭菌锅使用方法)白定量

7)质粒大/小抽原理及步骤

(手提、溶液I、II、III作用)

8)基因组DNA抽提

9)RNA提取;

(TRIZOL法原理、注意事项及步骤)

二、细胞方面

1)细胞培养、传代

2)细胞冻存与复苏

冻存液配制:(1)DMSO:血清=1:9(推荐)

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(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6均可

DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不

要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。

3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不

同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次)

4)转染

5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率)

6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化)

(5、6需学会SPSS软件及graphpadprism5软件使用)

7)Hoechst染色

8)结晶紫染色(不推荐)

9)苏木精/伊红染色

(9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮)

10)荧光显微镜的使用

11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱)

(7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据)

12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪

器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果)

三、动物实验

1)小鼠的定制:

常见的小鼠:

ICR小鼠(正常),9元/只

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BalB/C小鼠(正常),30元/只

SD大鼠(正常),30元/只

裸鼠(免疫缺陷小鼠),80元/只

NODSCID小鼠(免疫三缺陷),250元/只

其中前四种就是常用的,最后一种以后可能会用到。

浙江中医药大学:小鼠品系齐全,可提供以上小鼠静脉注射,提供体内原

位成瘤手术;杭州师范大学:NODSCID品系小鼠没有,不提供裸鼠静脉