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β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用作者：

陈奕芝,方永奇,梁毅,王绮雯,何玉萍【摘要】目的研究-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。

方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。

结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加；7.5、15、30g/mL-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏；15、30g/mL-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。

结论-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。

【关键词】PC12细胞；谷氨酸；钙；-细辛醚Abstract：

ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsof-asaroneonPC12cellsdamageinducedbyGlutamate.MethodTheeffectsof-asaroneonPC12cellsafterGlutamateintoxicationonmorphology,extentofdamage,livability,intracellularcalciumconcentrationandapoptosisratiowereobserved.ResultMorphologicalchanges,LDHleakageandintracellularcalciumconcentrationincreasing,andcellsurvivaldecreasingwereobservedinPC12cellsexposuredtoGlutamate.7.5,15,30g/mL-asaronecanincreasecellsurvival,decreaseLDHleakage.15,30g/mL-asaronecanreduceintracellularcalciumconcentrationandapoptosisratio.Conclusion-asaronepreventsthetoxicityofGlutamate,anditmaybeattributetoitseffectofanticalcium.Keywords：

PC12cells；Glutamate；Ca2+；-asarone本实验采用体外培养PC12细胞方法,用谷氨酸(Glu)造成损伤模型,观察-细辛醚对PC12细胞形态学、细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞内游离钙和细胞凋亡率的影响。

1实验材料1.1细胞、药物和试剂高分化PC12细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所。

Glu为Amresco产品；高糖DMEM粉剂培养基、胎牛血清、马血清、0.25%胰酶均为GIBCO产品；噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品；磷酸缓冲液(PBS)、二甲基亚砜(DMSO)为北京鼎国产品；Annexinv-FITC试剂盒购自晶美生物工程有限公司；Fluo-3/AM为BiotiumInc产品；LDH试剂盒购自南京建成生物工程研究所；细胞培养板为CORNING产品。

-细辛醚的制备由本中心完成,纯度99.44%。

临用前称取适量-细辛醚与吐温-80及甘油,以1∶1∶1充分混匀后加灭菌双蒸水配成终浓度为10mg/mL-细辛醚溶液,用时培养基稀释至所需终浓度。

1.2主要仪器设备CO2培养箱(NUAIK)；倒置相差显微镜(OLYMPUS)；BIO-RAD550型酶标仪；ALTRAEP