细胞和分子生物学实验。。。复习。。自己一个一个字手打的。。与君共勉。。.pdfVIP

其实都是实验报告上面的。。。。就是整理了下。。。拿去用吧～～

Experiment1细胞有丝分裂

间期：有明显的细胞核，染色质分布较均均，由于染色质易与碱性染料结合，故细胞核的染

色比细胞质深。核中可见1～3个染色较浅的呈球状的核仁

前期：细胞核膨大，染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝，其后染色丝进一步缩短变粗，形成

一定形态和书目的染色体（这时候的每条染色体由两条染色单体组成，但在光镜下一般不易

看清），核膜、核仁逐渐消失

中期：每条染色体中的成对染色单体逐渐分开（但着丝粒仍未分离）全部染色体（2n=16）

移向细胞中央的赤道面上，形成赤道板。在赤道板到两面有许多纺锤丝连接细胞两极和染色

体的着丝点，成为纺锤体，但不易观察到，此时染色体形态最典型

后期：着丝粒纵裂为二。这是，每条染色体的两条染色单体已完全分开，由于纺锤丝的牵引，

分别向细胞的两极移动，形成了数目相等的两组染色体（这是所观察到的染色体数目比原来

增加1倍，是由于S期内DNA含量倍增的结果）

末期：染色体移到两极并解旋为染色质，细胞中部出现细胞板，并逐渐向边缘发展。当染色

质构成核网时，核膜、核仁重新出现。细胞板达到两边，分裂结束，形成两个子细胞，细胞

又进入间期状态。

Experiment2动物染色体的制备

原理：染色体只有在分裂期的细胞，特别是中期细胞中表现出典型形态便于观察和计数，所

以必须采取特殊的技术方法，从发生有丝分裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是从

骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。骨髓细胞数量多、分裂旺盛，不需体外培

养和无菌操作，便于取材。

秋水仙素的作用：抑制纺锤体的形成，使细胞停留在分裂中期

KCl低渗溶液：使细胞膨胀，促使中期染色体散开

固定液：有固定作用，对染色体还有一定的分散作用

Giemsa染色液：染色

结果：低倍镜下，可见到许多大笑不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之

间的中期分裂象。小鼠染色体一般呈“U”形，染色体2n=40

Experiment3蟾蜍血细胞的体外融合

原理：细胞融合又称体细胞杂交，通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核

细胞的过程。是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后异核体同

步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的

杂种细胞，此杂交细胞具有很强的生命力，增殖旺盛。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因

定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段，也是制备单克隆细胞株的重要技术。

肝素：血液抗凝

PEG溶液：促进细胞凝集

Hanks溶液：终止PEG作用，平衡缓冲溶液使PEG的浓度降低至诱导融合的要求。

詹纳斯绿：染液

Experiment4AKPKm测定

原理：在温度pH和酶浓度一定时，酶促反应初速度与底物浓度的关系满足米-曼氏方程式（公

式自己补充）

Km是酶的特征常数，反映了酶与特定底物的亲和力大笑。测定Km值通常用双倒数法，推

导上述米-曼氏方程式可得一直线方程：（公式自己补充），在横坐标上的截距即可算出Km

值。AKP最适pH为10，而酶蛋白最稳定pH为8，测定其Km值时反应体系选择其最适pH。

本实验取pH为10。

Experiment5葡萄糖定量方法─标准管法测定葡萄糖含量

原理：在葡萄糖氧化酶的催化作用下β-D葡萄糖样化成过氧化氢和葡萄糖酸，在过氧化酶

的存在下，过氧化氢与苯酚、4-氨基安替比林与偶联酚缩合成可被分光光度计测定的红色醌

类化合物。其红色在510nm波长处有最大吸收峰，颜色的深浅在一定范围内与血葡萄糖浓

度成正比。

结果：人体正常血糖：3.9～5.8mmol/L

Experiment6蛋白质定量测定方法─标准曲线法测定蛋白质含量

原理：双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络

合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白

质含有多个肽键，在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓

度成正比，可以用比色法进行鉴定。

Experiment7酶联免疫吸附试验（ELISA)─双抗体夹心法

原理：酶联免疫吸附试验是一种固相酶免疫测定的方法，目前广泛应用于各种抗原和抗体的

检测。其基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体表面，并保持其免疫活性，再与酶标记抗

体或抗原联结，并保留酶的活性，然后加入酶反应的底物，后者被酶催化变为有色产物，反

应颜色的深浅可与相应抗原或抗体的量相关。在本实验中（1）用一直抗体包被