植物组织培养(2).pptVIP

注意事项：各种药品要充分溶解后才能混合。混合时要注意先后顺序，避免相互结合生成沉淀。铁盐单独配制，一般用硫酸亚铁和EDTA-Na2通过加热形成稳定的螯合铁贮存。生长素类先用少量95％乙醇或1mol/LNaOH加热助溶后，用水定容。细胞分裂素类先用少量1mol/L盐酸溶解，再用水定容。3.1.3配方基本培养基：MS、B5、White等。激素配比：主要是生长素和细胞分裂素的比例。如：MS+BA2+NAA0.1~0.23.1.4pH值一般5.6～6.0。高压灭菌后稍有下降，所以灭菌前要略调高。大于6.0，培养基变硬；低于5.0，琼脂凝固不好。一般用1mol/L的盐酸或氢氧化钠调节。培养阶段pH值会改变??????????????????????????????????????????????????????3.1.5培养基制备加一定量水，依次加入需要量的母液。加入需要量的蔗糖，溶解，定容。调节pH值。加入需要量的琼脂，加热溶解（要不断搅拌）。分装：在琼脂未凝时（40℃左右凝固）分装，量一般为容器的1/4～1/3，注意不要沾到容器口。封口。灭菌。存放。注意事项：不能高压灭菌的物质，在灭菌后温度下降但琼脂尚未凝固时，在无菌条件下，用过滤除菌法加入。配好的培养基一般应在两周内用完。3.2离体培养体系的建立3.2.1外植体的选择和处理3.2.2培养条件3.2.1外植体外植体（explant）从需要培养的母株分离的一小块植物材料。接种体（inoculum）已经培养的植物材料用于继代培养。地上部比地下部清洁。外植体越小，克服特殊植物病理问题（如病毒、支原体、细菌）的机会越大，但同时也降低了存活率。内部的组织比外部的不易受到污染。不同外植体反应不总是相同。外植体的选择2.外植体的灭菌根据培养容器大小将材料切割成适当大小；流水（自来水）冲洗植物表面；在酒精中晃动几秒钟；HgCL2（0.1～1%）＋吐温（润湿剂）2滴/100ml：3～5min；用经过高压灭菌的蒸馏水冲洗；商业漂白剂7~15%＋吐温2滴/100ml：10～30min；再用经过高压灭菌的蒸馏水冲洗几次。注释自来水：除去尘土，清洁剂去掉表面垢污。酒精：70%酒精使蛋白质失活。95%有时被用来溶解外植体表面的腊质层。NaOCl（商业漂白剂）或Ca(OCl)2：活性在于Cl-和其他氧化反应。HgCl2活性在于Cl-和使蛋白质失活的重金属。润湿剂（例如：吐温20或80）可以加到上述溶液中。*汞对环境是有毒的，因此汞溶液使用后收集到一个大的容器中。在溶液中加入氨水，汞可以沉淀。兰花花枝的无菌消毒3.2.2培养条件温度光照湿度气相条件温度事实上要对每种特定的植物甚至每一特定阶段调整最优化的温度。对大多数植物日间培养室的温度调节点在22±2°C。夜间的温度通常要低几度。容器内的温度要比室温高（可达5°C）。培养室的一个主要的问题是维持始终如一的温度。保障措施：需要安装一个很大的自动调温器，当温度太高时可以关掉灯光光通常用荧光灯，在架子上平行安放。大多数情况是装在培养室的外面，以避免热。以下的光参数是重要的：光周期和光强光周期大多数情况光周期不是最重要的。通常是16小时光照。为了节省能源和降低安装费培养室内不同架子上的灯不必同时打开。光强适当的光密度是30μmolm-2s-1，这一光强下为混合培养类型。自养型组培则需要达到250μmolm-2s-1。依据不同类型的容器，容器内的光强或多或少被减弱。PARPhotosyntheticactiveradiationPAR＝每秒每平方米波长在400~700nm之间的光子摩尔数LUX是一个不太合适的单位，因为它基于人眼的敏感性光谱

光谱是光形态建成的因素（植株高度以及叶片伸展）重要的比率：蓝光/红光，红光/红外光谱因灯不同而不同3植物组织培养的基本技术3.1培养基的成分与配制技术3.2基本操作3.3离体培养体系的建立3.1培养基的成分与配制技术成分母液配方pH值制备3.1.1基本成分水矿质元素碳水化合物生理活性物质生长调节剂附加物天然添加物1.水（H2O）水：可靠的水质是实验的保证可以使用以下装置：水质软化装置离子交换反向渗透蒸馏离子交换设备2.矿质元素大量必需元素（加入mM量级）：氮、磷、钾、钙、镁、硫微量必需元素（加入μM量级）：铁、锰、硼、锌、铜、钼其他：