净水剂微生物的分离纯化与鉴定..pdfVIP

一、目的要求[1]

1．通过从土壤中分离纯化细菌，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的分离

纯化方法和无菌操作技术。

2．掌握常用的微生物鉴定方法及革兰氏染色方法，掌握生理生化试验的原理与

方法。

3．掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。

二、基本原理

1．培养基的配制与灭菌。

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，

用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微

生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的

种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能

源、无机盐、生长因素等。配制培养基是不仅需要考虑满足这些营养成分的

需求，而且应该注意各营养成分之间的协调。此外不同微生物对pH要求不

一样，酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH

一般为中性或微碱性(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时都

要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。

配制培养基的流程如下：

原料称量→溶解加琼脂熔化调节pH值分装塞棉塞和包装灭菌

由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制

好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的

微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。高温的致死作

用，主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要大分子发生变性。高压蒸汽灭菌

是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的灭菌方法，本实验同样采用高

压蒸汽灭菌。

2．微生物的分离与纯化。

-1-/12

自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先

须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微

生物的过程称为微生物的分离与纯化。一般是根据微生物对营养、pH、氧气

等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某些抑制剂造成只利于该

菌种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。

分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法。本次毕业设计

是从中EPT菌悬液中分离多种有净水功能的菌株，实验将采用稀释平板分离

法利用选择性培养基分离菌种。

3．分离菌株的鉴定。

微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、形态、细菌

特点及生理生化等方面进行鉴定。

各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分解大分子碳水

化合物、蛋白质和过氧化氢的能力不同。这些都反映了它们是有不同的酶系

统。

细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然

界所有的有机分子都有可能得到分解；第二、使不同细菌之间有了互相作用

和互相依赖的基础。另一方面，微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要

依据之一，细菌的生化反应的多样性也被人们作为细菌的鉴定和分类方法来

利用，可以鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。

三、实验器材

1．菌种：

ETP菌悬液

[2]

2．培养基及培养菌种：

A牛肉膏蛋白胨培养基ETP菌悬液

B高氏培养基放线菌

C反硝化细菌培养基试管反硝化细菌

D硝化细菌培养基硝化细菌

EMRS培养基乳酸菌

F光合细菌培养基光合细菌

-2-/12

G马铃薯培养基酵母菌

H淀粉培养基细菌（生理生化鉴定）

I牛肉膏蛋白胨斜面培养基细菌（生理生化鉴定）

J明胶培养基细菌（生理生化鉴定）

3．溶液和试剂：

配制培养基药品（附表）蒸馏水、95%乙醇、香柏油、二甲苯、卢戈氏碘液、

5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液，草