植物组织培养(3).pptVIP

影响因素基因型激素配比：生长素、细胞分裂素4.2.2茎尖培养茎尖培养（shoottipcultureorapicalmeristemculture）是指对植物顶端的原分生组织和它衍生的分生组织的培养。材料茎尖分生组织培养：1mm(带有1－2个叶原基的生长锥），可去毒。普通茎尖培养：几毫米至几十毫米的茎尖、芽尖及侧芽培养。Shoottipculture茎尖培养的一般方法材料制备：精心预处理严格灭菌小心取材：体视显微镜、解剖针人工种子合成或人工种子是独立包埋的体细胞胚。通常术语“embling”用来描述从人工种子发育而来的植株。通常用海藻酸钠作为人工种子的包埋剂。也发展了用新的自裂胶珠的方法。直到现在人工种子的质量和保真度仍然是人工种子产品发展和大量生产的制约因素。1.4植物组织培养的基本程序无菌外植体的获得初代培养物的建立形态发生和植株再生培养产物的观察记载1.4.1无菌外植体的获得外植体携带有各种微生物，这些微生物一旦进入培养容器，会造成培养基和培养材料污染，实验无法进行。所以，污染是组织培养的一大障碍，需要利用各种灭菌剂进行外植体的灭菌。不同器官的灭菌方法茎尖、茎段、叶片根、块茎、鳞茎花蕾果实、种子1、茎尖、茎段、叶片的灭菌清水冲洗（茸毛较多的先用皂液洗涤），吸水纸吸干。0.1％～0.2％氯化汞浸泡2～10min；或70％酒精浸数秒，再在10％次氯酸钙浸泡5～20min（或2％15～30min）。无菌水冲洗3～5次，吸干。适当切块，接种。2、根、块茎、鳞茎的灭菌带土，易损伤。仔细刷洗，切除损伤部位，增加灭菌时间或浓度。0.1％～0.2％氯化汞浸泡5～12min；或70％酒精浸数秒，再在6～10％次氯酸钙浸泡5～20min。3、花蕾的灭菌花蕾中的花药处于无菌状态，采摘后可直接灭菌。70％酒精浸10～30s，0.1％氯化汞浸泡3～10min（或1％次氯酸钙10～20min）。4、果实、种子的灭菌有些表面具茸毛或蜡质，需加吐温-80。果实：70％酒精浸数秒，2％次氯酸钙10～20min。种子：0.1～0.2％氯化汞浸泡5～10min（或10％次氯酸钙20～30min）。1.4.2初代培养物的建立无菌环境：外植体、培养基、接种器械、接种工作台。规范操作：无菌操作合适条件：培养基、激素、其他添加物、外植体、培养条件等。抗生素的使用外植体灭菌是表面灭菌，无法除去侵入组织内部的微生物。有时可以考虑在培养基中加入抗生素。抗生素对植物生长可能有抑制作用，需摸索其合适的种类和浓度。注意添加方式，一般不能高压灭菌，有些需要过滤除菌。1.4.3形态发生和植株再生体细胞胚植株外植体（愈伤组织）具根、茎的两极器官植株器官分化单极器官先茎后根植株先根后茎植株1.4.4培养产物的观察记载愈伤组织诱导率＝产生愈伤组织的外植体数/外植体总数*100％胚状体诱导率＝产生胚状体的外植体数/外植体总数*100％芽分化率＝产生芽的外植体数/外植体总数*100％发根率＝发根芽数/培养芽数复习思考题：简述植物细胞全能性的概念。什么是植物细胞脱分化和再分化？愈伤组织是如何形成和生长的？植物离体培养中再生植株有哪些途径？何谓植物体细胞胚胎？其发生有哪些途径？影响植物离体形态发生的因素有哪些？为什么愈伤组织诱导一般选用固体培养基？愈伤组织的形成时期及特点。简述继代培养的原因及要点。体细胞胚胎的特征及发生方式。4植物器官培养植物器官培养是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。根、茎、叶、花器、果实、种子。4.1根的培养根系生理代谢研究的良好实验体系；研究器官分化、形态建成的良好体系；建立根无性系，用于制药；诱变育种。4.1.1离体根的培养方法固体培养法：平放液体培养法：振荡固体－液体双层培养法：根段形态学上端插入固体培养基，下端朝上浸露在液体培养基中。其他特殊方法4.1.2离体根所用培养基W