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erα36在pc12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探

辽宁师范大学硕士学位论文摘要研究表明，雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。

雌激素主要与雌激素受体结合，通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。

新近发现的ERa36是ER一0【一个亚型，它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中，并可介导膜起始的雌激素信号通路。

本室前期研究发现，ERa36也广泛表达在脑内多个区域，但作用尚不明确。

本实验利用RNA干扰技术建立的ERa36基因敲低细胞系，通过免疫细胞化学、免疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Westernblot等方法，探讨了ERct36在PCI2细胞血清营养剥夺耐受性中的作用，为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验依据。

结果：

1．原代培养不同时问的皮层和海马神经元中均有ERcG6表达，且主要分布在胞浆和胞膜上，并与Caveolin．1共定位。

原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高，NSE免疫阳性率均达到97％。

2．PCI2细胞对血清营养剥夺的耐受具：

百明显的时间和血清浓度依赖性。

细胞在含2．5％血清的无酚红培养基中生长速度减慢，其存活率与正常培养PCI2细胞相比显著降低，以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外，细胞在血清剥夺(o．5％血清)2h时，不会发生凋亡。

3．敲低ERct36，降低了细胞对低浓度E2的敏感性，增强了细胞血清营养剥夺的耐受性。

其中，pM和nM级别的E2对PCI2细胞促增殖作用减弱；PCI2细胞血清营养剥夺4h开始凋亡，敲低ERa36后细胞血清营养剥夺8h开始凋亡。

4．ERCc36介导E2激活的MAPK信号通路影响PCI2细胞的营养剥夺(低血清)耐受性。

在PCI2细胞中转染ER．a36表达质粒后再分别用不同浓度E2处理，与未用E2处理组相比，低浓度E2增强荧光素酶活性，10pM最为显著。

ER。

a36参与血清营养剥夺的细胞增殖和存活通路，并介导E2激活的MAPK／ERK和P13K／Akt信号通路的交叉对话，同时介导低浓度E2激活的MAPK信号通路。

结论：

敲低ER．a36降低PCI2细胞对低浓度E2的敏感性、增强细胞血清营养剥夺的耐受性；ER．cc36参与E2激活的增殖信号通路影响PCI2细胞血清营养剥夺(低血清)耐受性。

关键词：

ERa36；中枢神经系统；雌激素；血清ER-a36在PCI2细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探TheprimarystudyonroleofERa36inserumdeprivetolerabilityofPC12cellsAbstractManyresearchesshowthatestrogenpla5StheneuroDrotectiveroleinischemicstroke．Usually，estrogeninteractswithestrogenre...