义翘神州在线讲座《抗体开发技术平台解析及人源化改造技术分享》--答疑汇总.pdf

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义翘神州·在线讲座

《多样化抗体开发技术平台解析及人源化改造

技术分享》

答疑环节汇总

非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持，

也感谢北京义翘神州科技股份有限公司任为老师的精彩分

享。本次讲座已圆满结束，我们对直播过程中答疑环节大

家的问题以及两位老师的解答进行整理如下。

如果有需要补充的，有任何建议或想听到其他更多相

关主题的讲座，欢迎来信和我们交流，我们会根据您的宝

贵意见不断完善，以后给大家带来更多更精彩的在线讲座！

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问题1：人源化步骤里，CDR嫁接后，是回复突变，回复突变具体

是做了什么工作？

答：在讲座中提到过建模后确定关键氨基酸残基，回复突变要将影响

构象、或与抗原结合的氨基酸突变回鼠源氨基酸。

问题2：95%的人源化程度，是指可变区的人源化程度，还是包括

恒定区的全长抗体人源化程度？

答：这个是指可变区，恒定区本来就是人源的。

问题3：人源化程度是如何评价的/人源化程度到多少才可以达到成

药标准？

答：与人源序列比较，同源性至少不低于90%，95%以上更好。

问题4：您好，人源化表达量降低有哪些影响因素？要注意哪些设

计？

答：表达量降低一般是抗体形成了聚集，要注意对疏水氨基酸的改造。

问题5：请问人源化的抗体怎么做中和活性测试的？谢谢

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答：同亲本抗体的实验方法一样。

问题6：与鼠单抗人源化相比，兔单抗人源处于那个阶段呢？

答：有成功案例，但还需要更多摸索和验证。

问题7：人源化率是如何计算的？

答：与人源序列比较同源性。

问题8：人源化后V区的人源性能达到多少？

答：不低于95%。

问题9：请问，通过你们的人源化case，框架区的氨基酸如何定义

对特异性结合有关？

答：通过建模分析。

问题10：请问单个B细胞培养是96孔板吗？大概培养多久可以用

于ELISA检测，抗体量会达到多少？

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答：是96孔板，培养10天左右，抗体量在0.2ug/ml~10ug/ml。

问题11：请问单个B细胞培养10天左右是小鼠的B细胞吗？

答：是兔子的。

问题12：小鼠B细胞培养是在多大的孔板进行呢？每孔几个B细

胞培养？用的96还是384孔板？培养多久？培养成功率大概多少

呢？

答：先在96孔板，之后可以转到更大孔板中放大。B细胞由于差异，

多少不一样，每孔几个到上千个不等。成功率在10~20%，最高到

40%。

问题13：小鼠B细胞体外培养，细胞会有扩增嘛？小鼠B细胞最

多可以体外培养多久？

答：会有扩增，培养10-12天。

问题14：FACS单B细胞筛选，除特异性抗原标记外，需要其他什

么suracemarker染色么？