CHO-K1和DHFR突变株及其培养液配方.pdf

培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些

确定的激素及生长因子）组成

一、基础培养基

绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清

中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`sMEM的混合物，其中含有13种

必须氨基酸、8种维生素。而Ham`sF12也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另

外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12这两种培养基各取1/2，形成

神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细

胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成

分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，

而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损

伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中

含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在

许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到

0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2

来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2

浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常

在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。

实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

Leiboviz`sL15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的

BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止

培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特

别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已

用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。

二、血清

细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物

质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓

度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛

血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培

养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清用于神经元

培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。用大鼠进行神经元培养的某些研究者喜欢使用同型

血清；人类的胎盘血清，亦曾用于神经组织的器官类型的培养，也用在一些特殊培养种类中。

血清的不同批号含有不同的成分，所以许多人发现，应该在使用前对血清进行测试。大多

数试剂商提供样品，所满意的批号即可选用，这样可以一次得到足够一年用量的血清，血清

在使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。

三、无血清培养基

1979年神经细胞培养出现了一个重要进展，用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长

而不需要在培养基中添加血清。其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合

置换培养基中的成分，最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方，该配方称为N2，专门

用于神经细胞培养，最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养。它的基础培养基是

1：1的DMEM与H12的混合液，添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒。胰岛素

和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用，硒是谷胱甘肽产生的合

作因子，可能有助于过氧化物和超氧化物的水解，有报道说还能防止细胞的光照损伤。随后