高效液相色谱培训.pptx

HPLC的

使用与维护;基本原理和特点

液相色谱仪器部件

试验操作与应用

平常维护;基本原理和特点

;某些商品化仪器;启动液相色谱仪器的流程

;高效液相色谱仪构成;;液相色谱的流动相;液相柱---保留值与pH的关系;2.流动相类别;对溶剂的规定;不管采用何种途径，配制流动对应用新鲜水，水质规定越高放置时间越短。

理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。;过滤：0.45um或更小孔径滤膜

目的：除去溶剂中的微小颗粒，防止堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。

脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡

气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，变化保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动

;流动相的保留;1．梯度洗脱的特点;2．梯度洗脱的重要条件;梯度洗脱;梯度：低压混合;梯度滞后：系统体积的影响;梯度滞后大小的影响;滞后体积变化的影响;;色谱柱的连接

;锥箍锥度不合适导致渗漏

;除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相。

色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。

采用梯度洗脱时，柱在反复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。

;HPLC检测器应提供的功能;理想的HPLC检测器;敏捷度：信噪比;;吸光度检测器（UV/Vis）－长处;吸光度检测器（UV/Vis）－缺陷;背景吸取对紫外检测器噪音的影响;溶剂混合的基线噪音;为何如此重要？;基线噪音对积分的影响;维护流程图;吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时

单向阀－－定期清洗，压力波动大时

泵－－自动清洗

在线过滤器－压力大时清洗;材料：不锈钢烧结，孔径10um

故障：堵塞

体现：管路中不停有气泡生成

措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，

再用蒸馏水清洗;;;故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好

体现：系统压力波动大

措施：

打开排液阀，以异丙醇为流动相输液

拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗;故障：堵塞

现象：系统压力波动大或压力

偏高

措施：5％稀硝酸，超声波清洗

判断根据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则堵塞。;泵的保养：;柱的保养：;色谱柱柱内体积和平衡时间;色谱柱清洗保留

反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保留在90%的甲醇溶液中。

分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保留在5%叠氮化钠水溶液中。

离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积，保留在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保留在低盐的流动相中。;灯的保养：;谢谢！;今天用的图片都为

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