血清总胆固醇的测定.ppt

关于血清总胆固醇的测定WHAT血清中的胆固醇包括与脂肪酸结合的胆固醇酯（CE）和游离胆固醇（FC），前者约占总胆固醇的70%.人体内含胆固醇约140g，主要在体内合成，也可从食物中吸收。其中25%分布在脑和神经组织，10%~20%分布在血液中。第2页,共26页，星期六，2024年，5月WHY胆固醇是脂类化合物的一种，是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及构成细胞膜的重要成分。正常人血清胆固醇含量围:3.0~5.20mmol/L危险阈值:5.20~6.20mmol/L高胆固醇血症:≥6.20mmol/L第3页,共26页，星期六，2024年，5月如果其在血液中浓度过高，也可造成心脑血管的严重损害。肝功能障碍时CE会减低。临床检测TCH浓度，主要用于原发性和继发性脂代谢异常症的诊断、动脉粥样硬化疾病的危险性预测、重症肝病及营养学评价。第4页,共26页，星期六，2024年，5月HOW总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用后一方法。化学比色法：胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。第5页,共26页，星期六，2024年，5月胆固醇氧化酶法第6页,共26页，星期六，2024年，5月实验目的掌握血清总胆固醇测定的方法（胆固醇氧化酶法）与临床意义第7页,共26页，星期六，2024年，5月实验原理第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸。第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。第8页,共26页，星期六，2024年，5月试剂基础液：100ml0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替比林16mg,苯酚132mg,TritionX-1000.2ml酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合剂1ml,加基础液30ml,混匀既得胆固醇标准液（5.17mmol/L）:精准称取胆固醇200mg,用纯无水乙醇溶解，用乙醇定容至100ml，分装4oC保存，临用时取出第9页,共26页，星期六，2024年，5月操作第10页,共26页，星期六，2024年，5月混合后置于37oC水浴中保温15分钟，用空白管调零，在500nm波长处测吸光度。公式：第11页,共26页，星期六，2024年，5月 氧化酶法测定血清总胆固醇，此方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析第12页,共26页，星期六，2024年，5月临床意义胆固醇增高：常见于动脉粥样硬化，原发性高脂血症，（如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺陷症，多源性高胆固醇血症，混合性高脂蛋白血症等），糖尿病，肾病综合症，总胆管阻塞，甲状腺功能减退，肥大性骨关节炎，老年性白内障和牛皮癣等。总胆固醇降低：常见于低脂蛋白血症，贫血，败血症，甲状腺功能亢进，肝疾病，严重感染，营养不良，肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。第13页,共26页，星期六，2024年，5月注意事项1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致；2、比色应在30min内完成；3、试管在操作前尽量保持干燥；4、试剂中酶的质量影响测定结果；5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。第14页,共26页，星期六，2024年，5月此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。高TG血症对本法无明显影响。检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。第15页,共26页，星期六，2024年，5月健康1.饮食不当。过多进食含高胆固醇的食物，比如心、肝等动物内脏。身体内摄入过多的胆固醇，引起总胆固醇偏高，这也是造成总胆固醇偏高的原因之一2.肝细胞受损。胆固醇的酯化发生障碍，血中胆固醇减少，在肝硬化、重症肝炎等严重损害时，血中总胆固醇也降低。3.阻塞性黄疸。这时由于胆汁排出受阻，血中出现脂蛋白-X和肝内胆固醇合成亢进所致，以游离型胆固醇的增加为主，引起总胆固醇偏高。所以阻塞性黄疸是造成总胆固醇偏高的原因之一。第16页,共26页，星期六，2024年，5月总胆固醇偏高的饮食原