北京义翘神州讲座《体外诊断--抗体原料制备技术重难点分析及相关解决方案》--答疑汇总.pdf

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义翘神州·在线讲座

《体外诊断--抗体原料制备技术重难点

分析及相关解决方案》

答疑环节汇总

非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持，本次讲座

已圆满结束，我们对直播过程中答疑环节大家的问题以及老师的解

答进行整理如下。

如果有需要补充的，有任何建议或想听到其他更多相关主题的

讲座，欢迎来信和我们交流，我们会根据您的宝贵意见不断完善，

以后给大家带来更多更精彩的在线讲座！

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问题1：多肽用什么佐剂免疫效果好些，用什么免疫方案？

答：使用弗氏佐剂一般都可以获得较好的免疫效果，如果免疫不理想

可能是偶联效率低，或者多肽序列亲水性和免疫原性不好。

问题2：老师，请问免疫原的设计关注点主要在哪几个方面？

答：主要考虑多肽的亲水性、免疫原性、可及性、特异性、二级结构

和高级结构等方面。

问题3：请问多肽如何免疫？

答：多肽一定要偶联载体蛋白（KLH、BSA、OVA）后再免疫动物。

问题4：多肽偶联载体蛋白怎么选择呢，原则上要考虑什么呢？

答：常用于偶联的载体蛋白有KLH、BSA、OVA，免疫和检测要偶联

不同的载体蛋白，一般情况下载体蛋白有较强的免疫原性，体内会产

生针对载体蛋白的抗体，所以检测时选用与免疫不同的载体蛋白，避

免检测出现假阳性结果。

问题5：请问选择抗原多肽片段的那个分析是用软件做的吗？

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答：是的，这里有一些在线的多个表位分析软件可以免费使用，供参

考：

https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?BepiPred-2.0，

:8080/bcpred/predict.html

问题6：老师，糖基化修饰预测使用的什么软件呢？

答：在线的软件都可以做，例如：

http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/#opennewwindow。

问题7：你好，请问抗体稳定性用什么检测方法判断？蛋白A纯化的

抗体易聚集沉淀有什么方法可以改善？

答：可以用冻融、4℃放置、37℃加速等方法，测定抗体的聚集变化

和活性变化，看一下是否稳定，另外还可以测定热稳定性（Tm）。

避免抗体沉淀的方法有：1）采用预中和；2）可以提高洗脱pH；3）

可在洗脱液中添加一些帮助洗脱的添加剂；4）进行储存制剂优化。

问题8：张老师，请问怎么避免单抗的DG异构化？

答：DG异构化不可避免会发生，可以通过后期抗体改造来排除。

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问题9：请问老师，如何能有效获得抗体的天然构象？

答：抗体表达过程中注意培养环境，纯化过程中注意缓冲液的使用。

问题10：能详细介绍一下单B吗？

答：单细胞技术是通过流式分选、磁珠分选或微流控等方法分离出抗

原特异性的B细胞，单个B细胞可以直接PCR或者体外培养确定阳

性克隆进行P