57-解脲脲原体(UU)核酸定量检测标准操作规程(荧光PCR法).pdf

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北京泰普舜康医学检验所作业指导书编号:BJTIB-SOP-PCR057

解脲脲原体(UU)核酸定量检测标准操作规程(荧光PCR法)第一版

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解脲脲原体(UU)核酸定量检测标准操作规程

(荧光PCR法)

1.目的

规范解脲脲原体(UU)核酸DNA定量(PCR-荧光探针法)检测操作流程,准确进

行解脲脲原体(UU)DNA定量分析。

2.应用范围

使用泰普生物科学(中国)有限公司解脲脲原体(UU)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂

盒和Mx3000P荧光定量PCR仪、Roche480荧光定量PCR仪进行解脲脲原体(UU)DNA

检测。

3.职责

由PCR实验室制定程序文件,专业技术人员负责执行,实验室主管负责监督实施。

4.内容

4.1实验原理及其临床应用

采用聚合酶链式反应(PCR)及荧光标记探针技术,快速检测临床样品中解脲脲原体特有

序列,从而判断解脲脲原体的存在。适用于对生殖道、尿道分泌物拭子样本中的解脲脲原

体(UU)核酸进行体外定性检测,可用于解脲脲原体感染的辅助诊断及疗效监控。

4.2标本采集

4.2.1使用标本类型:生殖泌尿道分泌物等。

4.2.2标本采集

4.2.2.1生殖泌尿道分泌物

4.2.2.1.1男性:用细小棉拭子伸入尿道约2~4厘米,捻动拭子采集分泌物,将棉拭子置于

无菌玻璃管中,密封送检(采集分泌物前2小时禁小便)。

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4.2.2.1.2女性生殖道:用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物,再用宫颈刷或无菌棉拭子

插入宫颈内,停5秒后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物,将宫颈刷或棉拭子置于无菌玻

璃管中,密封送检。

4.2.2.1.3女性尿道:用无菌生理盐水棉球洗净尿道口,再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米,

捻动拭子采集分泌物,将棉拭子置于无菌玻璃管中,密封送检。

4.2.3标本保存和运送:标本可立即用于测试,也可保存于-20℃待测,保存期为6个月。

标本运送时应采用0℃冰壶。

4.3试剂准备

4.3.1供应商:泰普生物科学(中国)有限公司

4.3.2此实验试剂应放在冰箱-20℃保存,在实验前5分钟取出备用,实验后应立即放回

箱-20℃。

4.3.3如果试剂出现了封口蜡破损导致液体外漏以及过期试剂,应及时更换。

4.4标准品和质控品

4.4.1标准品、质控品来源:随试剂盒,由厂家提供。

4.4.2标准品、质控品保存条件:置于-20℃冰箱中保存。

4.4.3标准曲线和质控频度:每次实验均需做标准曲线和质控。

4.5操作过程说明

4.5.1DNA提取

4.5.1.1质控品处理:分别取出UU阴性、弱阳性、阳性质控品,8,000rpm离心数秒,各

吸50ul至1.5灭菌离心管中,加入50ulDNA提取液充分混匀,100℃恒温处理10±1分钟。

将处理好的质控品转至4℃静置10min,10000rpm离心5min,4℃保存备用。

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