3404 免疫电泳法公示稿.pdf

附件：3404免疫电泳法公示稿

附件1

3404免疫电泳法

本法系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相

免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗

体生成的沉淀弧的位置和形状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。

试剂

（1）巴比妥缓冲液（pH8.6）称取巴比妥4.14g与巴比妥钠23.18g，加适量水。

加热使溶解，冷却至室温，再加叠氮钠0.15g，加水使溶解成1500ml。磷酸盐缓

冲液（pH8.6）：甲液：取磷酸氢二钠35.8g，加水溶解，并稀释至1000ml；乙液：

取磷酸二氢钠1.38g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液1000ml与乙液

15ml，混匀，调节pH值至8.6。

（2）0.5%氨基黑染色剂液称取氨基黑10B0.5g，加甲醇50ml、冰醋酸10ml与

水40ml的混合液，溶解使溶解，摇匀。

（3）1.5%琼脂糖溶液称取琼脂糖1.5g，加水50ml与巴比妥缓冲液磷酸盐缓

冲液（pH8.6）50ml，加热使溶胀完全溶胀。

（4）脱色液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml，混合均匀混匀。

（5）溴酚蓝指示液称取溴酚蓝50mg，加水使溶解成100ml使溶解。

对照品溶液正常人血清或其他适宜的对照品。

供试品溶液的制备用0.85%~0.90%氯化钠溶液将供试品蛋白质浓度稀释成

0.5%。取供试品适量，加0.85%~0.90%氯化钠溶液稀释制成蛋白质浓度约为0.5%

的溶液。

检查法将1.5%琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，厚度约3mm，静置，

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待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于琼脂糖凝胶板负极1/3处的上下各打1孔，

孔径3mm，孔距10~15mm。测定孔加供试品溶液10μl和溴酚蓝指示液1滴，

对照孔加正常人血清或人血浆10μl和溴酚蓝指示液1滴。用3层滤纸搭桥和巴

比妥缓冲液磷酸盐缓冲液（pH8.6）接触，80~100V恒压电泳约2小时（指示剂

迁移到前沿），当溴酚蓝指示液迁移至琼脂糖凝胶板前沿时，关闭电源。电泳结

束后，在两孔之间距离两端3~5mm处挖宽3mm槽，向槽中加入血清抗体或人

血浆抗体，槽满但不溢出。放湿盒中37℃扩散24小时。扩散完毕后，用

0.85%~0.90%氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖凝胶板，以除去未结合蛋白质。将浸泡

好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液染色，再用脱色液脱色至背景基本无色。

用适当方法保存或复制图谱。与对照品溶液比较，供试品溶液的主要沉淀线应为

待测蛋白质。

注意事项

（1）电泳时应有冷却系统，否则琼脂糖凝胶会出现干裂。

（2）用0.85%~0.90%0.9%氯化钠溶液浸泡应充分，否则背景不清晰。

（3）如采用凝胶电泳扫描仪，可不进行染色脱色，直接扫描保存图谱。

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起草说明

1、原巴比妥缓冲液修订为磷酸盐缓冲液，避免使用管控和剧毒试剂。

2、在现行通则采用染色脱色法保存图谱的基础上，增订了采用凝胶电泳扫

描仪直接扫描保存的方式。直接扫描不仅可以快速、准确地获取电泳图谱，且因

不需要额外的染色脱色步骤，实验过程更为环保，也节省了时间和成本。

起草单位：上海市食品药品检验研究院

联系方式：021

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