3203聚山梨酯80测定法-公示稿.pdf

13203聚山梨酯80测定法

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3第一法（比色法）

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5第二法（荧光胶束法）

6本法系基于高效液相色谱系统和荧光染色法建立，用于测定聚山梨酯80的含量。其原理

7是聚山梨酯80在达到临界浓度后可形成具有疏水内核的胶束，（流动相中的）荧光染料苯基

8萘胺在水溶液中荧光信号较低,在疏水环境（如胶束核心）中荧光信号激增,其荧光强度在

9一定范围内与聚山梨酯80浓度呈线性关系,通过测定荧光强度值（峰面积）可计算供试品溶

10液中聚山梨酯80的浓度。

11试液配制

12苯基萘胺溶液取N-苯基-1-萘胺0.11g，置50mL量瓶中，加乙腈适量使溶解并定容至刻

13度，摇匀。

14聚氧乙烯（35）十二烷基醚溶液取30%聚氧乙烯（35）十二烷基醚溶液1.0ml，置10mL

15量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。

16三羟甲基氨基甲烷混合溶液取氯化钠8.75g和三羟甲基氨基甲烷6.05g，加水800ml，搅

17拌使溶解，用盐酸调节pH至8.0，加乙腈50ml，加水至1L，摇匀，滤过，加苯基萘胺溶液和

18聚氧乙烯（35）十二烷基醚溶液各0.5ml，摇匀。

19供试品溶液取供试品，必要时定量稀释至适宜浓度。

20对照品贮备液精密称取聚山梨酯80对照品约0.25g，用水溶解并定容至100ml，摇匀。

21对照品溶液临用新制。精密量取对照品贮备液适量，用水分别定量稀释制成每1ml中

22分别约含聚山梨酯800.05mg、0.10mg、0.20mg、0.40mg和0.50mg的溶液，摇匀。

23系统适用性溶液每1ml约含聚山梨酯800.20mg的对照品溶液。

24试验条件采用反应线圈（如KnittedReactionCoil,5m×0.50mmID；或REACTION

25COIL-750µl或其他适宜反应线圈）；流动相为三羟甲基氨基甲烷混合溶液，流速1.5ml/min；

26检测波长激发光350nm、发射光420nm，增益值5；采集时间2.5min，压力上限100bar，柱温

2735℃，样品盘温度2℃～8℃，进样量10μl。

28系统适用性要求所有系统适用性溶液图谱中聚山梨酯80峰面积的相对标准偏差应不大

29于10.0%，系统适用性溶液中聚山梨酯80的回收率（聚山梨酯80浓度的测定值与理论值的比

30值）应在90%～110%之间；线性回归方程的相关系数不小于0.996。

31测定法取系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色

32谱图。以对照品溶液浓度与相应峰面积计算线性回归方程，再根据供试品溶液图谱中聚山梨

33酯80的峰面积计算供试品溶液中聚山梨酯80的浓度。

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34注意事项1.流动相需临用新制，避光保存；检测器增益值可视实际情况调整。

352.如供试品中的蛋白等组分在聚山梨酯80出峰位置存在明显干扰，可对供试品进行稀释

36或前处理（参照第一法）后再进行分析。

373.供试品进样6针后，需进样系统适用性溶液以确定系统适用性。

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