现代农林技术与服务专业《3.3.4.1分光光度法检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留》.pdf

分光光度法检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留

PP1:乡村振兴，农检相行,同学们好，今天我们来学习分光光度法

检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留。

PP2:分光光度法可综合检测多种农副产品中的有机磷和氨基甲酸

酯类农药残留，包括水果、蔬菜、茶叶、粮食等。这堂课我们主

要依据国标?蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测?，

具体学习蔬菜中农残的检测。

PP3:内容包括三个：一、检测方法；二、检测结果判定；三、操

作要点。

PP4:在学习检测方法前，先了解一下需要的试剂和设备，试剂包

括pH8.0缓冲溶液、显色剂、底物、乙酰胆碱酯酶，这些试剂可

按标准制备，pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与

3.2g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。显色剂：分别取160mg

二硫代二硝基苯甲酸〔DTNB〕和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲

溶液溶解，4℃冰箱中保存。底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加

3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超过

两周。乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min

的吸光度变化ΔA0值应控制在0.3以上，摇匀后置4℃冰箱中保

存备用，保存期不超四天。当然，也可直接选用含有以上试剂的

试剂盒，操作更简单。

PP5:实验要用到的仪器主要有三个：农药残留快速检测仪〔或食

品平安检测仪〕、常量天平和恒温箱。

PP6:下面，给大家介绍一下具体操作步骤。第一步：对照溶液测

试，如下图，先取试剂瓶A中的缓冲溶液2.5ml参加到试管B中，

再依次取试剂瓶C中的酶液0.lmL、试剂瓶D中显色剂0.1ml参

加到试管B中，摇匀,放入37℃恒温箱，静置15分钟，再取试剂

瓶E中底物0.lmL参加到试管B中，摇匀，此时检测溶液开始显

色反响，立即放入农残快速检测仪的比色池中，记录反响3min

的吸光度变化值ΔA0。

PP7:第二步：样品溶液测试，如下图，先进行样品处理，选取有

代表性的青菜样品，擦掉外表泥土，剪成1cm左右见方碎片，取

样品1g，放入到试管B中，取试剂瓶A中缓冲溶液5mL参加到试

管B中，振荡1~2min，倒出试管B中样品提取液，静置3~5min，

再取试管B中倒出的提取液2.5mL参加到试管C中，再依次取试

剂瓶D中的酶液0.lmL、试剂瓶E中显色剂0.1ml参加到试管C

中，摇匀,放入37℃恒温箱，静置15分钟，再取试剂瓶F中底物

0.lmL参加到试管C中，摇匀，此时检测溶液开始显色反响，立

即放入农残快速检测仪的比色池中，记录反响3min的吸光度变

化值ΔAt。

PP8:仪器检测完成，进行检测结果分析、判定。先来计算检测结

果。检测结果按公式计算：抑制率(%)=[(ΔA-ΔA)/ΔA]×100

0t0

式中：ΔA是对照溶液反响3min吸光度的变化值；ΔA是样品

0t

溶液反响3min吸光度的变化值。结果判定，结果以酶被抑制的

程度表示。通过公式计算出的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂

量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果

的样品需要重复检验2次以上，同时对阳性结果的样品，可用其

它方法进一步确定具体农药品种和含量。

PP9:我们在进行分光光度法检测农残时，需注意以下操作要点，

以免因操作不当，出现假阴性或假阳性结果。第一、注意蔬菜中

次生物质对酶的影响，以防止产生假阳性。葱、蒜、萝卜、芹菜、

香菜、茭白、蘑菇及番茄中，含有对胆碱酯酶有影响的次生物质，

容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株蔬菜萃取或采用

外表测定法。

PP10:第二、注意反响温度与时间控制。