细胞生物学细胞生物学研究方法-课件精选课件.pptVIP

细胞生物学第章细胞生物学研究方法;（优选）细胞生物学第章细胞生物学研究方法;;;;;分辨率;样品的制作;（二）荧光显微镜Fluorescencemicroscope;;用途分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。

组织化学或细胞化学染色（histochemicalorcytochemicalstaining）是利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究的技术。

选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。

沉降顺序核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高尔基体——核蛋白体。

六、定量细胞化学分析技术

sin（α/2）

能显示细胞样品的立体结构。

相差显微镜

原代细胞(primaryculturecell)

显微镜是观察细胞的主要工具。

在装配设计上趋于采用组合方式，集普通光镜加相差、荧光、暗视野、DIC、摄影装置于一体，从而操作灵活，使用方便。

细胞中有一些成分具有特定的吸??光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。

5摄氏度）或液氮（-196摄氏度）中冰冻。

用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。

(三)、细胞拆合与显微操作技术

电子束穿透力很弱，用于电镜观察的标本须制成厚度仅50nm的超薄切片，用超薄切片机ultramicrotome）制作。;;（三）激光共聚焦扫描显微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM;;;;（二）荧光显微镜Fluorescencemicroscope

特点光源为短波光(紫外光)；

分辨力数值不会小于0.

类型速度沉降、等密度沉降。

电子束穿透力很弱，用于电镜观察的标本须制成厚度仅50nm的超薄切片，用超薄切片机ultramicrotome）制作。

原代细胞(primaryculturecell)

力场比速率沉降法大10~100倍，需要高速或超速离心。

常用介质氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。

电子显微镜以电子束为光源。

力场比速率沉降法大10~100倍，需要高速或超速离心。

sin（α/2）

特点光源为短波光(紫外光)；

是分离细胞器及各种大分子基本手段。

膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等

细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。

组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。

分辨力数值不会小于0.

原理：将放射性同位素标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，制取切片，涂上卤化银乳胶，经放射性曝光，使乳胶感光。

六、定量细胞化学分析技术;;相差显微镜的基本原理;（六）微分干涉差显微镜Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）;;;;1.原理

以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比。

由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。

分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。

用于观察超微结构（小于0.2μm）。

用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。;特点光源为短波光(紫外光)；

（二）荧光显微镜Fluorescencemicroscope

原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。

9nm电磁要求散射和透射形成明

能显示细胞样品的立体结构。

sin（α/2）

标本置于干冰（-78.

用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。

常用荧光物质酸性品红，甲基绿，中性红，EB等。

根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。

同核体相同基因型的细胞融合而成。

吸去染料干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸出地方没有染料沉积，从而出现负染效果，分辨力可达1.

原理：包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。

Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。

选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。

介质密度高，陡度大，介质最高密度大于被分离组分的最大密度。

制片：固定（甲酫）、包埋（石蜡）切成厚约5μm的薄片以便观察。

光学显微镜以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源。

脂溶染色法：借苏丹