细菌的生化实验.pdfVIP

细菌的生化实验

各种细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解力量不同,其代

谢产物也不同.用生物化学方法测定这些代谢产物,可用来区分和鉴

定细菌的种类.利用生物化学方法来鉴别不同细菌,称为细菌的生物

化学试验或称生化反应.生物化学试验的方法许多,这里主要介绍碳

水化合物的代谢试验1．糖(醇、苷)类发酵试验

(1)原理:不同种类细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,因而对各

种糖(醇、苷)类的代谢力量也有所不同,即使能分解某种糖(醇、苷)

类,其代谢产物可因菌种而异.检查细菌对培育基中所含糖(醇、苷)

降解后产酸或产酸产气的力量,可用以鉴定细菌种类.

(2)方法:在基础培育基中(如酚红肉汤基础培育基pH7.4)加入

0.5~1.0％(w/v)的特定糖(醇、苷)类.所使用的糖(醇、苷)类有许多

种,依据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等,见

表6-4-1.将待鉴定的纯培育细菌接种入试验培育基中,置35℃孵育

箱内孵育数小时到两周(视方法及菌种而定)后,观看结果.若用微量

发酵管,或要求培育时间较长时,应留意保持其四周的湿度,以免培育

基干燥.

(3)结果:能分解糖(醇、苷)产酸的细菌,培育基中的指示剂呈酸性

反应(如酚红变为黄色),产气的细菌可在小倒管(Durham小管)中产

生气泡,固体培育基则产生裂隙.不分解糖则无变化.

(4)应用:糖(醇、苷)类发酵试验,是鉴定细菌的生化反应试验中最

主要的试验,不同细菌可发酵不同的糖(醇、苷)类,如沙门菌可发酵

第1页共6页

葡萄糖,但不能发酵乳糖,大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖.即便是

两种细菌均可发酵同一种糖类,其发酵结果也不尽相同,如志贺菌和

大肠埃希菌均可发酵葡萄糖,但前者仅产酸,而后者则产酸、产气,故

可利用此试验鉴别细菌.

单糖四碳糖:赤藓糖,五

碳糖:核糖核酮糖木糖阿拉伯糖,六碳糖:葡萄糖果糖半乳糖

甘露糖双糖蔗糖(葡萄

糖＋果糖)乳糖(葡萄糖＋半乳糖)麦芽糖(两分子葡萄糖)

三糖棉子糖(葡萄糖＋果糖＋半乳糖)

多糖菊糖(多分子果糖)淀粉

醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇

非糖类肌醇

2．葡萄糖代谢类型鉴别试验

(1)原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必需有分子氧参与的,称为氧

化型;能进行无氧降解的为发酵型;不分解葡萄糖的细菌为产碱型.发

酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖,而氧化型细菌在

无氧环境中则不能分解葡萄糖.本试验又称氧化发酵(O/F或Hugh－

Leifson,HL)试验,可用于区分细菌的代谢类型.

(2)方法:挑取少许纯培育物(不要从选择性平板中挑取)接种2支

HL培育管中,在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以

隔绝空气(作为密封管),另一管不加(作为开放管).置35℃孵箱孵育

48h以上.

第2页共6页

(3)结果:两管培育基均不产酸(颜色不变)为阴性;两管都产酸(变黄)

为发酵型;加液体石蜡管不产酸,不加液体石蜡管产酸为氧化型.

(4)应用:主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别.肠杆菌科、弧

菌科细菌为发酵型,非发酵菌为氧化型或产碱型.也可用于鉴别葡萄

球菌(发酵型)与微球菌(氧化型).

3．甲基红(MR)试验

(1)原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸

进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等,使培育基pH下降至4.5以

下时,加入甲基红指示剂呈红色.如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生

的酸进一步转化为其它物质(如醇、醛、酮、气体和水),培育基pH

在5.4以上,加入甲基红指示剂呈桔黄色.

(2)方法:将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中,35℃孵育

48h~96h后,于5ml培育基中滴加5~6滴甲基红指示剂,马上观看结

果.

(3)结果判定:呈现红色者为阳性,桔黄色为阴性,桔红色为弱阳性.