哺乳动物双杂交技术修改.pptx

药学122

陈木易哺乳动物双杂交技术

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Amammaliantwo-hybridsystem-basedassayforsmall-molecularHIVfusioninhibitorstargetinggp41

XiaoxiShuia,XinhuaLub,YanGaoa,ChenLiua,FengzhiRenb,QinJiangb,HuaZhangb,BaohuaZhaoa,∗,ZhihuiZhenga,b,∗∗

作者:

杂志:AntiviralResearch90(2011)54–63

发表时间:February2011

影响因子:11年：4.3；12年：3.9；13年：3.9；14年：3.434

分区：JCR2区

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哺乳动物双杂交系统：

DNA结合域和转录激活域分别由不同质粒产生，融合于DNA结合域的一个蛋白质(“X)与融合于转录激活域的第二个蛋白质(“Y”)相互作用时，DNA结合域就与转录激活域紧密关联。在这个系统中，蛋白X与Y的相互作用导致报告基因的转录

哺乳动物双杂交技术原理

哺乳动物双杂交系统在本文中的应用：

检测靶向gp41的HIV融合抑制剂

gp41是什么？

gp41是HIV病毒包膜糖蛋白的跨膜成分，由345个氨基酸组成，分为3个结构区：胞外区（ectodomain）、跨膜区（transmembrane，TM）和胞质区（endodomain，CP）。

gp41的结构

gp41的胞外区包含3个功能片段：①位于gp41的N末端融合肽（FP）（为一段富含Gly的疏水多肽，含有约20个氨基酸，当包膜糖蛋白gp120与辅助受体作用后，融合肽就插入靶细胞膜内）；②位于融合肽下游的N末端重复序列（Nheptadrepeat，NHR，HR1）；③位于gp41胞外区C末端的重复序列（C-heptadrepeat，CHR，HR2）

gp41在HIV-1与靶细胞融合过程中的作用

HIV-1从被感染的细胞中出胞时，gp41以高能的gp120／gp41三聚体复合物形式存在，无融合活性。当病毒感染靶细胞时，首先是HIV-1的包膜糖蛋白gp120与靶细胞表面的CD4受体分子结合，gp120的构象发生改变，暴露出与协同受体结合的位点，进而与CXCR4或者CCR5等协同受体结合；从而导致gp120和gp41分裂，gp41构象也因此发生改变，其融合肽端与靶细胞膜相互作用，NHR形成三聚体卷曲螺旋核，CHR反向平行与其结合进而形成gp41的核心三聚体发夹状结构（trimer-of-hairpins），该结构将病毒膜与靶细胞膜拉近，排除两膜中间的水分子，形成融合孔，最终导致HIV-1进入靶细胞内

融合抑制剂：

多肽类

中和抗体

小分子物质

小分子融合抑制剂检测原理

Theprincipleofthemammaliantwo-hybridsystem-basedassayforscreeningHIV-1fusioninhibitorstargetinggp41.(A)Intheabsenceofinhibitors,theinteractionbetweenNHRandCHRofgp41promotestranscriptionoftheluciferasereportergene.(B)Inthepresenceofinhibitors,theinteractionisinterrupted,whichresultsinthereductionofluciferaseexpres