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ICS71.040CCSB04
22
吉林省地方标准
DB22/T3646—2024
长白山林蛙油鉴别高效液相色谱蛋白质特征图谱法
AuthentificationofChangbaimountainRanaeOviductus-high
performanceliquidchromotography(HPLC)basedprotein
characteristicchromatogram
2024-07-25发布2024-09-01实施
吉林省市场监督管理厅发布
DB22/T3646—2024
I
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》和GB/T20001.4—2015《标准编写规则第4部分:试验方法标准》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。
本文件由吉林省农业农村厅负责组织实施。
本文件起草单位:吉林农业大学、吉林大学、吉林省林蛙标准化技术委员会、吉林黄栀花药业有限公司。
本文件主要起草人:王诗涵、王志寒、王永生、王道君、伊常青。
DB22/T3646—2024
1
长白山林蛙油鉴别高效液相色谱蛋白质特征图谱法
1范围
本文件规定了林蛙油鉴别蛋白质组成的特征图谱法的分析原理、试剂及材料、试剂配制、仪器设备、样品、试验步骤及实验数据分析的要求。
本文件适用于长白山林蛙油真实性的鉴别。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
长白山林蛙油ChangbaimountainRanaeOvidutus
蛙科动物中国林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)雌蛙的输卵管。主产于长白山地区,由《中华人民共和国药典》(2020版)一部收载的哈蟆油,经采制干燥而得。
4原理
中药特征图谱可采用特征峰保留时间评价,供试品特征图谱的相关色谱峰应与相应的参照物色谱峰保留时间相同。特征峰相对保留时间规定值范围一般应不超过±10%。实验以溶菌酶作参照物,通过分析林蛙油蛋白质特征峰与参照峰的相对保留时间确定目标峰,根据指纹图谱软件提取长白山林蛙油中蛋白质组成成分的特征峰,建立蛋白质对照特征图谱,进行真实性鉴别。
5试剂和材料
警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。
除特别说明外,所有试剂均为分析纯。5.1石油醚:沸点范围60℃~90℃。
5.2乙腈(C2H3N):色谱纯。
5.3二硫苏糖醇(C4H10O2S2,DTT)。
5.4三氟乙酸(C2HF3O2,TFA)。
5.5溶菌酶:纯度>98%。
5.6二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O)。
DB22/T3646—2024
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5.7无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)5.8硫酸铵((NH4)2SO4)。
5.9盐酸胍(CH5N3.HCl)。
5.10水(H2O):GB/T6682规定的一级水。
6试剂配制
6.1磷酸盐缓冲液(PBS)(0.1mol/LpH7.4):使用天平称取6.04g二水合磷酸二氢钠和8.71g的无水磷酸氢二钠,混合后用水定容至1L。
6.260%饱和度的硫酸铵溶液:在25℃下,使用天平称取390g硫酸铵,加水至1L后搅拌溶解即获得60%饱和度的硫酸铵溶液。
6.3盐酸胍(1mL6mol/L)含DTT(10mmol/L):使用天平称取57.3g盐酸胍和0.1542gDTT混合,加入水溶解定容至100mL。
7仪器设备
7.1高效液相色谱仪-紫外检测器。
7.2冷冻离心机:0rpm~12000rpm,0℃~4℃。
7.3电热鼓风干燥箱。
7,4旋转蒸发仪。
7.5粉碎机:频率:50Hz
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