土壤中分解尿素细菌分离与计数导学案.pptx

第2课时土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.简述尿素在生产实践中的作用及分解尿素的细菌的作用。2.研究培养基对微生物的选择作用。3.进行土壤中分解尿素细菌的分离与计数。4.简述活菌计数技术的应用。

1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于①生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时②或③其他微生物生长。?(2)选择培养基:在微生物学中,将允许④种类的微生物生长,同时⑤或⑥其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。?阻止目的菌株一、理论基础特定抑制抑制阻止

2.统计菌落数目:常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的⑦足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个⑧。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在⑨的平板进行计数。此外,测定微生物数量的常用方法还有⑩直接计数。?3.设置对照:设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需有。?30~300活菌稀释度显微镜111213非测试因素空白对照可信度

土壤中某样品细菌的分离与计数实验的操作步骤1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样。?2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。?14土壤培养基二、实验设计15

3.微生物的与观察:将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250mL),充分摇匀,吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中,依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养,及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中,观察能否产生颜色反应。?4.细菌的计数:当菌落数目稳定时,选取菌落数在______的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。??16培养171mL199mL180.1mL202122选择平均数30~300

1.如何确认所制备的选择培养基的确起到了选择作用?欲确认所制备的选择培养基是否起到了选择作用,应同时对对照组的牛肉膏蛋白胨培养基进行接种——若对照组培养基中菌落种类明显复杂于实验组,则可确认选择培养基的确起到了选择作用。答案：

2.分离分解尿素的细菌的培养基为何能起到选择作用?微生物的生长需要氮源,大多数微生物不能直接利用尿素作氮源,但分解尿素的细菌却可以尿素作氮源,因此,在以尿素为唯一氮源的培养基中,唯有能利用尿素的微生物方可生长繁殖,其他微生物则因不能生长繁殖而被淘汰,因而该培养基可起到筛选分解尿素的细菌的作用。答案：3.如何对活菌进行计数?菌落是单个微生物在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度,形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞的群落。可以通过稀释涂布平板法计算活菌的数目,其原理是培养基上的一个菌落来源于一个活菌。答案：

1.筛选菌株的原理是什么?请举例说明。知识点一:筛选菌株人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),造成有利于该菌生长的环境,同时抑制或阻止其他微生物生长。培养一定时间后,该菌数量上升,再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。实例:从热泉中筛选出Taq细菌。热泉70~80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物,从而使耐热的Taq细菌脱颖而出。答案：

2.简述筛选菌株的方法。利用选择培养基分离某种菌株。选择培养基指允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。答案：3.请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实例。(1)制备原理:根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学因素、物理因素的抗性不同而制备培养基。(2)制备方法:在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长、抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。(3)用途:使混合菌株中的劣势菌变成优势菌,提高该菌的