DNA的重组与转座.ppt

P因子在生殖细胞中活化P因子在P型雄蝇与M型雌蝇杂交后代的性细胞中被激活。这是因为组织特异性剪接事件去除了全部内含子，从而产生了编码转座酶P因子在体细胞的剪接保留了第3个内含子，产生转座的阻抑物，它是雌蝇细胞质遗传阻抑物的存在解释了M品系雄蝇杂交后代依然是可育的P因子受阻抑物的控制*2特异位点重组的结果依赖于重组位点的位置和方向3特异位点重组在一个特定的短(20-200bp)DNA序列内（重组位点），并且有特异的酶（重组酶）和辅助因子对其识别和作用。位点特异重组:依赖内切核酸酶位点(噬菌体?attB位点)依赖插入序列(IS)依赖长末端重复序列(LTR)依赖信号序列(SS)转座子染色体靶位上?噬菌体DNA的整合与切除?噬菌体与宿主的特异重组位点称为附着位点“(attachmentsite)细菌相应的附着位点attB噬菌体的的附着位点attP切除整合二 DNA的转座转座子：在基因组中可以移动的一段DNA序列。转座：转座子能从基因组的一个位点移到另一个位点。不以独立的形式存在转座子编码其自身的转座酶。转座的频率很低。转座子可插入到一个结构基因或基因调节序列内，证实插入的突变试验插入序列:IS1,IS2,IS5,IS10Generalstructure反向重复序列复合式转座子COMPOSITETRANSPOSONSE.g.Tn10IS10IS10Tetr靶DNA靶序列复制正向重复转座酶基因1转座子的分类1）插入序列（IS因子）插入序列编码转座所需的酶，两侧是短反向末端重复序列插入的靶序列在插入过程中被复制，在转座子两端先形成两个短正向末端重复序列正向重复序列的长度为5-9bpDNA转座子PeterJ.Russell,iGenetics:Copyright?PearsonEducation,Inc.,publishingasBenjaminCummings.Fig.20.1Theinsertionsequence(IS)transposableelement,IS12）复合型转座子（Tn）转座子可携带编码转座以外的其他基因-药物抗性基因复合转座子有一个中心区，其两侧的端部各有一个IS元件复合转座子有一个或两个IS元件都能进行转座复合转座子可以作为一个单位进行转座，但两端的活性元件也可独立地转座。PeterJ.Russell,iGenetics:Copyright?PearsonEducation,Inc.,publishingasBenjaminCummings.Fig.20.4StructureofthenoncompositetransposonTn3转座酶内酰胺酶解离酶II型：其两末端由38bp的反向重复序列组成PeterJ.Russell,iGenetics:Copyright?PearsonEducation,Inc.,publishingasBenjaminCummings.Fig.20.3StructureofthecompositetransposonTn10I型：两个末端由相同的IS序列构成，IS序列有正向和反向两种排列方式2转座过程发生的机制转座酶识别转座子的末端反向重复序列并在其3’端切开在靶DNA上造成交错切口，转座子与突出的5’末端相连，填补缺口PeterJ.Russell,iGenetics:Copyright?PearsonEducation,Inc.,publishingasBenjaminCummings.靶位点重复序列的形成依据转座子移动的机制，可将转座分为两种类型：复制型转座:涉及两种酶转座酶，作用在原来转座子的末端解离酶(一种重组酶），作用于复制拷贝元件非复制型转座和保守型转座只需要转座酶复制性转座：产生转座子的一份拷贝，该拷贝插入到受体位点，供体位点序列不变，因此供体和受体位点都有转座子的一份拷贝转座子拷贝到新位点非复制性转座：转座子仅从供体位点向受体位点作物理性移动，从而在供体位点造成断裂，若断裂不被修复，后果将是致死的转座子移动到新的位点保守型转座：序列的直接移动，没有核苷酸键的损失。（与?噬菌体的整合、删除有相似性）移动保留了键PeterJ.Russell,iGenetics:Copyright?PearsonEducation,Inc.,publishingasBenjaminCumm