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食品微生物检验技术实验指导
实验一培养基的配制及器材的灭菌
一、目的要求
1、学习并熟练培养基的制备的方法、步骤和技术。
2、学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方法和技术。
3、为下一次实验做好实验前的准备。
二、实验原理
培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的
营养基质,它是进行科学研究,生产微生物制品及应用等方面的基础。由于各
类微生物对营养的要求不同,培养目的和检测需要不同,因而培养基的种类很
多,要根据培养目的和检测需要不同,选择配制不同的培养基。
从培养基的用途来区分,培养基可分为选择培养基、增殖培养基、鉴
别培养基等。
选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生
长的培养基,称之为选择培养基。如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长;
而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长;结晶紫能抑制革兰氏阳性
细菌的生长等。
增殖培养基在自然界中,不同种的微生物常生活在一起,为了分离我
们所需要的微生物,在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质,
以增加这种微生物的繁殖速度,逐渐淘汰其它微生物,这种培养基称为增殖培
养基,这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲,增殖培养
基也是一种选择培养基。
鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品,使难以区分的微生
物经培养后呈现出明显差别,因而有助于快速鉴别某种微生物。这样的培养基
称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美
蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。例如食品检验中常用的麦康凯培养基
是一例。它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用
(选择性),乳糖和中性红(指示剂)能帮助区别乳糖发酵肠道菌(如大肠杆
菌)和不能发酵乳糖的肠道致病菌(如沙门氏菌和志贺氏菌)。
灭菌原理:高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅
内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内
的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢
出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导致
菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌
水、金属用具。一般培养基在121.3℃灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温
使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性
与其本身的含水量有关,在菌体受热时,当环境和细胞内含水量越大,则蛋白
质凝固就越快,反之含水量越小,凝固缓慢。因此,与湿热灭菌相比,干热灭
菌所需温度高(160—170℃),时间长(1—2小时)。但干热灭菌温度不能超
过180℃,否则,包器皿的纸或棉塞就会烤焦,甚至引起燃烧,因而一般塑料制
品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器
1、药品及试剂:
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、MgSO·7HOFeSO、NaCl等
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2、仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱
3、玻璃器材及其它
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、药匙、玻璃漏斗、pH试纸(5.5-9.0)、
棉花、牛皮纸、记号笔、棉线、纱布、吸管(1ml)、培养皿、玻璃珠。
四、方法步骤
(一)、配制培养基
配制培养基的制备与分装步骤
1、称量除琼脂外,按培养基配方比例依次准确地称取药品,放入适
当大小的烧杯中。蛋白胨极易吸水,称量时动作要快。补足所需水分,混匀后
加入琼脂。
2、加热溶解向烧杯内加入所需水量的一部分,放到电炉上加热,同时
不断进行搅拌,使其溶解,最后补足所需水分。加热过程所蒸发的水分,应在
全部原料溶解后加水补足。
3、调pH值用精密pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试
培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节
到配方要求的pH值为止。
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