GB_T 39920-2021蛙病毒感染检疫技术规范.docxVIP

ICS65.020.30B41

中华人民共和国国家标准

GB/T39920—2021

蛙病毒感染检疫技术规范

QuarantineprotocolforinfectionwithRanavirus

2021-04-30发布2021-11-01实施

国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

发布

Ⅰ

GB/T39920—2021

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。

本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、北京市水产技术推广站、北京海关。

本标准主要起草人:王娜、张旻、徐立蒲、景宏丽、张舟、李霆、张永宁、张利峰、吴绍强、张文、江育林。

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GB/T39920—2021

蛙病毒感染检疫技术规范

1范围

本标准给出了两栖类动物蛙病毒感染(infectionwithRanavirus)的临床症状,规定了蛙病毒感染的病原分离培养、聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测方法。

本标准适用于蛙病毒感染的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出入境动物检疫采样

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。bp:碱基对(basepair)

CPE:细胞病变效应(cytopathiceffect)

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

dATP:三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸(deoxyadenosinetriphosphate)dCTP:三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸(deoxycytidinetriphosphate)

dGTP:三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸(deoxyguanosinetriphosphate)

dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)dTTP:三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸(deoxythymidinetriphosphate)EB:溴化乙锭(ethidiumbromide)

EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)

ELISA:酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay)EPC:鲤上皮瘤细胞系(epitheliomapapulosumcyprinicellline)

HEPES:4-羟乙基哌嗪乙磺酸[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonicacid]IgG:免疫球蛋白G(immunoglobulinG)

MCP:主衣壳蛋白(majorcapsidprotein)OD:光密度(opticaldensity)

PBST:含有Tween-20的磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsalineTween-20)PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

Taq:水生栖热菌(thermusaquaticus)

TMB:3,3,5,5-四甲基联苯胺(3,3,5,5-Tetramethylbenzidine)

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GB/T39920—2021

4试剂或材料

4.1水:符合GB/T6682,一级。

4.2蛙病毒参考株:由农业农村部水生动物防疫主管部门指定机构提供。

4.3蛙病毒单克隆抗体:由农业农村部水生动物防疫主管部门指定机构提供。

4.4羊抗蛙病毒血清:由农业农村部水生动物防疫主管部门指定机构提供。

4.5酶标兔抗山羊IgG。

4.6细胞系:EPC。

4.7TaqDNA聚合酶:5U/μL。-20℃保存。

4.8dNTP:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各2.5mmol/L,-20℃保存。

4.9MgCl2:25mmol/L,-2