霉菌和酵母菌检验方法验证报告.docx

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上海复硕正态企业管理咨询有限公司FS-RF-057A/0

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方法验证报告

文件编号

方法名称

霉菌和酵母菌检验方法

方法依据

化妆品安全技术规范（2015）第五章6霉菌和酵母菌检验方法

分析项目

霉菌和酵母菌

编制/日期

审核/日期

批准/日期

ADDINCNKISM.UserStyle

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方法验证报告

方法依据/原理

1.1方法依据：化妆品安全技术规范（2015）第五章6霉菌和酵母菌检验方法

1.2原理：化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

使用范围

2.1适用于化妆品霉菌和酵母菌的测定。

设备情况

表1使用仪器设备一览表

设备名称

型号

设备编号

是否校准

校准有效期

是否满足预期用途

电子天平

■是□否

2022/7/29

■是□否

立式压力蒸汽灭菌器

■是□否

2022/7/29

■是□否

电热鼓风干燥箱

■是□否

2022/7/29

■是□否

数显恒温水浴锅

■是□否

2022/7/29

■是□否

霉菌培养箱

■是□否

2022/7/29

■是□否

超净工作台

■是□否

2022/7/29

■是□否

表2标准物质和关键物料登记表

名称

生产厂家

规格/纯度

批号

有效期

状态

孟加拉红培养基

■正常可用

□异常

环境条件情况

表3环境条件

日期时间

要求温度/℃

实测温度/℃

要求湿度/%

实测湿度%

是否满足预期用途

■是□否

■是□否

人员能力情况

表4相关人员

人员

学历

专业

相关检测经历年限

方法验证/确认情况

6.1实验步骤

6.1.1样品前处理

6.1.1.1液体样品：水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取10mL样品加到90mL灭菌生理盐水中，混匀后，制成1：10检液。

6.1.1.2油性液体样品：取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。

6.1.1.3膏、霜、乳剂半固体状样品：

亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。用其上清液作为1:10的检液。

疏水性样品：称取10g，置于灭菌的研钵中，加10mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成1：10检液。

6.1.1.4固体样品：称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10的检液。使用均质器时，则采用灭菌均质袋，将上述水溶性膏、霜、粉剂等，称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min—2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石蜡，10mL吐温80，70mL灭菌生理盐水，均质3min—5min。

6.1.2操作步骤

6.1.2.1样品稀释，取1:10、1:100、1:1000的检液各1mL分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各接2个平皿，注入融化并冷至45℃±1℃左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5d，观察并记录。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入15mL孟加拉红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28℃±2℃培养箱内培养5d，为空白对照。

6.1.2计算方法

先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在5个—50个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g（或每mL）检样中所含的霉菌和酵母菌数。其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。

6.1.4菌落计数及报告方法

6.1.4.1首先选取平均菌落数在5个—50个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数报告之（见表1中例1）。

6.1.4.2若有两个稀释度，其