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内标法（ISTD）第31页,共53页，星期六，2024年，5月选择内标物的标准 1.样品中不存在 2.容易得到 3.化学性质与样品相似 4.不会与样品发生反应 5.在感兴趣组分附近流出 6.与其它组分分离度良好 7.色谱性质稳定*内标与样品的浓度范围应接近第32页,共53页，星期六，2024年，5月第三章液相色谱分析高效液相色谱与气相色谱比较高效液相色谱仪构造（原理，维护）常见问题及维护第33页,共53页，星期六，2024年，5月相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测差别：分析对象和流动相的差别（1）分析对象差别气相色谱：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；占有机物的20%高效液相色谱：不受样品挥发性和热稳定性的限制，分子量大、难气化、热稳定性差及离子型样品均可检测；占有机物的80%3.1高效液相色谱与气相色谱比较第34页,共53页，星期六，2024年，5月（2）流动相差别气相色谱：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用高效液相色谱：流动相为非惰性液体,种类较多，选择余地广流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性第35页,共53页，星期六，2024年，5月（3）操作条件差别气相色谱：加温操作高效液相色谱：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）第36页,共53页，星期六，2024年，5月高压输液系统进样系统分离系统检测系统记录系统3.2高效液相色谱仪构造第37页,共53页，星期六，2024年，5月溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2L使用色谱纯溶剂，并预先脱气高压泵输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动流量精度和重复性为0.5%左右应耐腐蚀，密封性好在线脱气装置脱去流动相中的溶解气体，也可采用超声脱气流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳定，造成基线漂移，噪音增加（1）高压输液系统第38页,共53页，星期六，2024年，5月梯度淋洗在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果、缩短分析时间的目的第39页,共53页，星期六，2024年，5月（2）进样系统第40页,共53页，星期六，2024年，5月液相色谱柱一般用内部抛光的不锈钢（玻璃，铝，铜）制成，其内径为2~6mm，柱长为10~50cm，填料粒度5－10μm，柱形多为直形，内部充满微粒固定相，柱温一般为室温或接近室温

（3）分离系统第41页,共53页，星期六，2024年，5月液相色谱分类类型第42页,共53页，星期六，2024年，5月正相色谱及反相色谱根据流动相与固定相极性的差别程度，可将液液色谱分为：正相分配色谱和反相分配色谱第43页,共53页，星期六，2024年，5月正相色谱柱及反相色谱柱的维护第44页,共53页，星期六，2024年，5月检测器的类型：溶质性检测器仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应紫外、荧光、电化学检测器等总体检测器对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应示差折光检测器等（4）检测系统第45页,共53页，星期六，2024年，5月紫外检测器（VWD）原理：待测组分对特定波长的紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律紫外光电二极管阵列检测器（DAD）三维色谱图VWD及DAD检测器第46页,共53页，星期六，2024年，5月3.3常见问题及维护第47页,共53页，星期六，2024年，5月第48页,共53页，星期六，2024年，5月第49页,共53页，星期六，2024年，5月第50页,共53页，星期六，2024年，5月第51页,共53页，星期六，2024年，5月第52页,共53页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第53页,共53页，星期六，2024年，5月**********关于色谱基础培训1.1色谱法的由来1906年由俄国植物学家Tsweet创立植物色素分离固定相——CaCO3颗粒流动相——石油醚色谱柱：玻璃管第一章色谱法概述第2页,共53页，星期六，2024