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麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案

一、目的

验证微生物检测室购买的由广东环凯微生物科技有限公司生产的麦康凯液体培养基

的配制和灭菌方法，验证该配制灭菌程序适合于检测室麦康凯液体培养基的配制和灭菌，

为培养基配制和灭菌提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。

二、适用范围

麦康凯液体培养基的配制和灭菌

三、职责

1.技术负责人

1.1为验证组长，负责组织编写并审核验证方案及报告。负责组织方案及报告的执行。

2.检测室负责人

2.1负责验证方案的起草和方案的具体实施；负责验证过程的记录。

3.检测员

3.1负责验证方案的具体实施；负责验证过程的记录。

4.经理

4.1负责批准方案及报告。

四、作业标准

1.概述

培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。一般采用商品脱水培养基，

临用时按使用说明或相关规定进行称量、配制、调节pH、分装、灭菌等。应按照生产商提

供参数进行培养基的灭菌。

培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝

固力或pH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌,培养基灭菌方法和条件，应

通过无菌性试验和促生长能力、抑制能力试验进行验证。灭菌器中培养基的容积和装载方

式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。本

公司现在检验用培养基的灭菌方法均为湿热灭菌方法。

2.验证实施计划

年月至年月

3.培训

报告审批后，由验证小组组长对报告实施过程中涉及人员进行培训，以保证报告顺利

实施，并做好培训记录，培训记录见附件1：《培训情况确认表》。

4.仪器确认

4.1确认内容：确认过程所用仪器是否经校验，并有校验合格证且在校验有效期内。

确认所用试剂及菌液是否在有效期内。

4.2标准要求：仪器应已校验，有校验合格证并在校验有效期内。

4.3仪器及试剂的确认记录见附件2：《仪器确认记录》及附件3：《试剂确认记录》

5.验证内容

5.1取同一批干粉培养基配制三批进行以下验证。

5.2配制灭菌过程

5.2.1称量配制分装：称取麦康凯液体培养基干粉280g，加入纯化水8L搅拌加热煮

沸至完全溶解，分装1000ml蓝盖瓶中，每瓶1000ml，配制完成后于1小时内于121℃高

压灭菌15min。

5.2.2灭菌器中装载方式（满载）：将分装好的培养基置于灭菌器内均匀分布，使灭菌

器处于满载分布状态。若培养基不能满足满载分布，则用纯化水替代。

5.2.3生物指示剂的放置：将生物指示剂9支分别放置于各培养基中，均匀分布（如

右图），开始灭菌。灭菌完成后按说明书要求进行培养。对照管不做灭菌处理，与试验管

同时培养。结果见附件4《生物指示剂试验结果》

可接受标准：根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为

黄色为不合格。对照管由紫色变为黄色为该指示剂有效。

5.2.4灭菌前后的pH值的测定：灭菌前分装100ml冷却至

25℃测定pH，取已灭菌的培养基100ml，放冷至25℃测定pH值

可接受标准：应在7.3±0.2范围内。

5.2.5外观性状

可接受标准：灭菌后培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、蓝盖有被培

养基沾染、倾泄等、均应挑出弃去。

贮存中培养基发生颜色变化、浑浊，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制

和灭菌程序验证。

5.3麦康凯液体培养基质量控制试验

5.3.1本检查可与培养基的无菌检查同时进行。

5.3.2菌液制备：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的浓菌液，用pH7.0无菌氯化钠-

蛋白胨缓冲液制成50-100cfu/ml的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内

使用。

促生长能力：接种不大于100cfu的大肠埃希菌菌液于100ml麦康凯液体培养基和对

照培养基中，于43.0℃培养不大于24小时。

抑制能力：接种不小于100cfu