菌种选育理论与技术.ppt

吡哆醇与代谢拮抗物异烟肼的分子结构梯度平板法也常用于抗代谢拮抗物突变株的筛选，以提高相应代谢产物的产量。如：吡哆醇高产菌株筛选第32页,共49页，星期六，2024年，5月梯度平板法(Gradientplate)第33页,共49页，星期六，2024年，5月?纸片扩散法与梯度平板法的原理类似，用打孔器将较厚的滤纸打成小圆片，并使纸片吸收一定浓度的药物，经干燥或不经干燥，放入涂布了菌悬液的平板上，一般9厘米的培养皿中等距放置三片为宜。经培养后观察围绕纸片的抑菌圈，抑菌圈内出现的可能就是抗性菌。纸片扩散法第34页,共49页，星期六，2024年，5月阶梯性筛选法的缺点?阶梯性筛选法只有在抑制区域才能挑选抗性菌，而低浓度区域面积较大，优良的抗性突变株若被分散在低浓度区域或远离纸片的区域，则可能没有被检出，因此，漏检的几率较大。第35页,共49页，星期六，2024年，5月2、营养缺陷型突变株筛选与筛选营养缺陷型有关的三类培养基①基本培养基（MM，minimalmedium）：能满足某一菌种的野生型或原养型菌株营养要求的最低成分的合成培养基②补充培养基（SM，supplementalmedium）：在基本培养基中有针对性地补加某一种或几种营养成分，以满足相应的营养缺陷型菌株生长需要（其他营养缺陷型仍不能生长）的培养基③完全培养基（CM，completemedium）：可满足该菌各种营养缺陷型菌株营养需要的天然或半合成培养基第36页,共49页，星期六，2024年，5月营养缺陷型突变株的筛选方法1)淘汰野生型抗生素法：将诱变处理液在MM中培养短时让野生型处于活化阶段，而缺陷型处于休眠状态且在培养基中加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺陷型孢子却因未发芽而保留在处理液中第37页,共49页，星期六，2024年，5月2)检出缺陷型原理：在固体基本培养基和完全培养基上，生长情况完全不同，缺陷型在CM上生长良好，而在MM上则不生长，野生型都能生长具体方法：影印法、点种法、夹层法第38页,共49页，星期六，2024年，5月第39页,共49页，星期六，2024年，5月也称任意法用接种针或牙签将CM上长出的菌落在MM和CM两副平板上接种，依次在相应位置点种，然后一起培养，观察其生长情况此法结果明确，但工作量大点种法第40页,共49页，星期六，2024年，5月先在培养皿上倒一层基本琼脂培养基，凝固后涂上一层含菌的MM，凝固后再倒一薄层MM琼脂培养基，培养24h，将出现的菌落标记，然后倒上一层CM琼脂培养基，再培养。这时第二批长出的菌落就可能是缺陷型此法缺点是，结果有时不明确，而且将缺陷型菌落从夹层中挑出并不很容易夹层法第41页,共49页，星期六，2024年，5月3)营养缺陷型生长谱的确定方法二以不同组合的营养混合物与融化凉至50℃的MM培养基混合铺成平皿，然后在这些平皿上划线接种各个缺陷型菌株于各相应位置，培养后根据在这些组合长出可推知其营养因子在5～6个平皿上可测20株菌以上。第42页,共49页，星期六，2024年，5月第三节杂交育种杂交育种是指将两个基因型不同的菌株经吻合(或接合)使遗传物质重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。杂交育种的目的在于：（1）通过杂交使不同菌株的遗传物质进行交换和重新组合，从而改变原有菌株的遗传物质基础，获得杂种菌株(重组体)；（2）可以通过杂交把不同菌株的优良生产性能集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的菌株生活力下降等缺陷；（3）通过杂交，可以扩大变异范围，改变产品的质量和产量，甚至出现新的品种；（4）分析杂交结果，可以总结遗传物质的转移和传递规律，促进遗传学理论的发展。第43页,共49页，星期六，2024年，5月霉菌的杂交育种准性生殖(Parasexualreproduction)是指真菌中不通过有性生殖的基因重组过程。①选择直接亲本②异核体的形成③杂合双倍体的形成④体细胞重组染色体交换、染色体单倍化第44页,共49页，星期六，2024年，5月第四节原生质体技术育种一、原生质体制备1．菌体的预处理（甘氨酸、EDTA、青霉素等）2．菌体的培养时间（对数期、对数期到平稳期）3．酶浓度4．酶解温度和pH5．酶解时间(20-40℃)6．渗透压稳定剂第45页,共49页，星期六，2024年，5月二、原生质体融合二、原生质体的融合（PEG和Ca2+)三、原生质体的再生四