HPLC液相色谱原理.pptxVIP

现代生物学仪器实验技术

齐凤慧

生命科学学院

高效液相色谱

第一章高效液相色谱仪

液固吸附色谱

一、原理:

固定相是极性吸附剂，由于不同官能团样品具有不同极性，因而对固定相的吸附能力不同。极性越大，吸附能力强；极性越低，吸附能力越弱而导致分离。

第一章高效液相色谱仪

液固吸附色谱

分离对象：

①官能团有差别的不同类型化合物

②几何异构体（由于固定相表面是刚性结构，即吸附中心处于吸附剂表面一定位置上。溶质分子官能团与吸附中心的相互作用随分子的几何形状而改变，当官能团与吸附中心对准，作用就强。）

第一章高效液相色谱仪

液固吸附色谱

填料的类型及其选择

①按形状分：a.球形b.无定形

②按多孔程度分：a.多孔型b.薄壳型

③按极性分：a.极性b.非极性

硅胶的活性控制及标准化

市售未处理硅胶→加热4－6小时，活化去水。再加进定量水分，使吸附剂含水量保持恒定。

第一章高效液相色谱仪

液固吸附色谱

填料的类型及其选择

①按形状分：a.球形b.无定形

②按多孔程度分：a.多孔型b.薄壳型

③按极性分：a.极性b.非极性

硅胶的活性控制及标准化

市售未处理硅胶→加热4－6小时，活化去水。再加进定量水分，使吸附剂含水量保持恒定。

第一章高效液相色谱仪

液液分配色谱（LLC)

定义－以一种液体作固定相，它均匀地涂敷在大小一致的小颗粒惰性担体上。另一种液体作移动相。涂敷在担体上的固定相应与移动相极性有很大差别，即两者不相溶。

原理：溶质分子X在固、液两相中存在分配平衡K＝[X]S/[X]m，不同的溶质在两相中

有不同的分配系数K，因而在两相中有不同的溶解度。在固定相中溶解度大，

tR↑；在移动相中溶解度大，tR↓。

第一章高效液相色谱仪

键合相色谱

定义－固定相通过某种化学反应将有机分子以共价键结合在色谱担体的表面，

这种色谱类型称之。

制备硅胶基质化学键合固定相，注意：

①键合反应前，将硅胶表面硅氧烷全部水解为硅烷醇。

②除去硅胶表面吸附水，使表面完全呈自由硅醇基。

第一章高效液相色谱仪

反相色谱的保留机理

①疏溶剂理论②双保留机理

分离对象：

①同系物：烷烃数↑→tR↑直链tR＞支链tR

②化合物极性↑→tR↓固定相对组分保留的影响：

①碳链长度：碳链↑→tR↑

②烷基覆盖量：覆盖量↑→tR↑

第一章高效液相色谱仪

离子交换色谱

一、原理：

以离子交换剂为固定相，与流动相中离子型物质发生可逆的离子交换，根据溶质离

子、离子交换固定相、流动相离子之间相互作用力的差异而导致色谱分离。

常见：硅胶为基体的键合相离子交换剂，PH对交换容量的影响：

①强酸、强碱性离子交换剂，交换性能不受PH影响，交换容量恒定。

②弱酸性阳离子交换剂，在较高PH条件下弱碱性阴离子交换剂，在较低PH条件下发生离子交换

第一章高效液相色谱仪

什么是高效液相色谱？

HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)——高效液相色谱法是一项高效、快速的分析分离技术。是一种区别于经典液相色谱基于仪器方法的高效能分离手段。

是现代分离测试的重要手段：

高性能色谱柱，高精度输液泵，高灵敏度检测器...

广泛应用于各个领域:

医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业...

第一章高效液相色谱仪

高效液相色谱原理

是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离两相中有一相是固定的,叫作固定相(StationaryPhase)有一相是流动的,称为流动相(MobilePhase),流动相又叫洗脱剂,溶剂相(Phase):物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面。