菌种筛选演示精品课件课件.pptx

第六章菌种的筛选与保藏;简介;第一节从自然界中分离菌种;（一）采样：采集含菌的样品

;采土样的方法;（二）增殖培养（富集培养）;增殖培养的方法

控制培养基的营养成分

控制培养基的pH

控制培养的温度

热处理

添加抑制剂

这些方法的适用范围;芽孢杆菌

;抑制不需要的菌类

;（三）纯种分离;纯种分离的方法:稀释分离;划线分离;平板反应快速检出法;平皿反应快速检出法;（1）纸片培养显色法

滤纸饱浸含有指示剂的液体培养基

用接种环接种

保湿恒温培养

据菌落周围变色圈和菌落直径比值判别目的物产量

;（2）透明圈法

碳酸钙平板透明圈：产酸

;（3）变色圈法

淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶

支链淀粉平板喷稀碘液：

蓝色圈：异淀粉酶

无色圈：液化型淀粉酶

葡聚糖加刚果红平板：葡聚糖酶

木聚糖加刚果红平板：木聚糖酶

橄榄油加罗丹明B平板：脂肪酶;（4）生长圈法

适用：氨基酸，核苷酸，维生素产生菌的选育

工具菌：

营养缺酸型，不能合成的物质（生长因素）为目的菌积累的产物

菌落形态明显不同于目的菌

方法：

106~107工具菌与样品稀释液一起涂布至琼脂培养基表面，具有生长圈的菌落即为目的菌

;（5）抑制圈

适用：抗生素产生菌的选育

工具菌：对目的抗生素敏感的微生物

例：目的菌为产生抗G+细菌的抗生素的菌株

工具菌可使用金黄色葡萄球菌

方法

目的菌分离：稀释分离法，培养长出菌落

代谢物积累：用打孔器（6mm）将菌落连同周围琼脂培养基一起取下，放一无菌空培养皿内，保湿培养4-5天，使新产生抗生素积累于小琼脂块中

测定：取107工具菌涂布于球脂培养基，将小琼脂块放于上面培养过夜，抑菌圈的出现，说明琼脂块中有抗生素，大小说明抗生素单位的高低;琼脂块培养法筛选抗生素产生菌程序;(四)筛选;筛选为什么要分为初筛和复筛进行？

两者的区别

筛选条件如何确定;初筛和复筛的比较;五.培养工艺条件试验与生产实验;好氧培养（摇瓶发酵）;举例：产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选;台酚蓝平板上的透明圈;举例产蛋白酶芽孢杆??的分离筛选;二、厌氧菌的培养法;常用的厌氧培养法;厌氧培养装置;32;;34;35;第二节.菌种的保藏;一、菌种的退化

（一）菌种退化的现象;菌种退化的表现

生产形状的劣化，遗传标记的丢失，原有的典型形状的不典型等。;(二)退化的防止

控制传代次数

创造良好的培养条件

利用不易退化的细胞传代

采用有效的菌种保藏方法;二.菌种的保藏;（一）菌种保藏的原理;;措施

低温：生长温度低限约为-30℃，水溶液中酶促反应温度低限-140℃

干燥

缺氧

避光

缺乏营养

添加保护剂

甘油、脱脂牛奶、血清白蛋白

添加酸度中和剂;常用的菌种保藏方法;（二）菌种保藏方法

1、斜面保藏法：

方法：接种适宜斜面培养基→培养→4℃保藏

措施：低温：4℃

适用：各大类

保藏期：1~6个月

用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间

;2、甘油悬液保藏法：

方法:培养好的微生物细胞加15~30%甘油缓冲液→装入保藏管中→放入-70℃冰箱

措施：低温、保护剂

适用于细菌和酵母等微生物,保藏期5~10年;可以保藏感受态的大肠杆菌3个月。

优缺点：

;3、冷冻干燥保藏:

是一种有效的长期保藏菌种的方法

方法：菌种培养→用保护剂悬浮→加入安醅管中→低温冻结（-40℃或-70℃）→抽真空（至0.01mmHg）→最后熔封管口→至于4℃保藏

措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂

适用：各大类

保藏期：5~15年或更长

优缺点:

适用的菌种多,保藏期长,存活率高,便于分发等优点

设备较贵、操作比较烦琐

;4、液氮超低温保藏法：

方法：微生物细胞混悬于含保护剂的液体培养基中→分装入耐低温的安培管中→缓慢预冷→移至液氮罐中保藏。

措施：超低温、有保护剂

优缺点

适用于各大类微生物、保藏期长（15年以上）

需要特殊的设备、操作较复杂、管理费用高和发

放不便

;其它保藏方法

石蜡油封藏法

方法：斜面或半固体接种→培养→加无菌液蜡高出培养基1cm→4~15℃保藏

措施：低温，隔氧

适用：不能利用石油的各大类

保藏期：1~2年

优点：简便

;砂土管保藏法

方法：孢子或芽孢悬液→加入无菌砂土管中→干燥→封口→保藏

措施：无营养，缺氧，干燥

适用：产孢子（芽孢）微生物