蛋白质变性与沉淀.ppt

关于蛋白质变性与沉淀一、实验目的1.掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法；

2.熟悉刻度吸量管的正确使用；

3.了解蛋白质变性与沉淀两者的关系。第2页,共19页，星期六，2024年，5月二、实验原理（一）蛋白质沉淀原理蛋白质溶于水形成稳定的胶体溶液，维持蛋白质胶体溶液稳定因素：1.蛋白质颗粒表面的水化膜；2.蛋白质颗粒表面的电荷。去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出。第3页,共19页，星期六，2024年，5月蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法、盐析法、重金属离子沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法等。第4页,共19页，星期六，2024年，5月（二）蛋白质变性原理蛋白质受某些物理或化学因素的影响，空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。蛋白质变性，分可逆；不可逆。第5页,共19页，星期六，2024年，5月三、实验仪器与试剂1.仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。2.试剂5％蛋白质溶液、2.5％蛋白质溶液、10％ZnSO4溶液、o.1mol/LNaOH、1％三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）第6页,共19页，星期六，2024年，5月四、实验内容及操作步骤1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质2.乙醇沉淀蛋白质（一）实验内容（二）操作步骤第7页,共19页，星期六，2024年，5月1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质1）实验原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpHpIpHpIpI两性离子负电荷正电荷盐↓盐↓第8页,共19页，星期六，2024年，5月2）操作步骤试剂（滴）试管1试管2试管35%蛋白质溶液2D2D2D0.1mol/LNaOH2D——10%ZnSO420D—20D1%三氯醋酸—20D—现象3）观察、记录实验现象，并解释之。第9页,共19页，星期六，2024年，5月结构记录试剂（滴）试管1试管2试管35%蛋白质溶液2D2D2D0.1mol/LNaOH2D——10%ZnSO420D—20D1%三氯醋酸—20D—现象沉淀沉淀澄清第10页,共19页，星期六，2024年，5月实验现象分析试管1中加入碱，其pHpI，蛋白质分子带负电荷，与Zn2+结合生成不溶于水的盐沉淀。试管2中加入酸，其pHpI，蛋白质分子带正电荷，与三氯醋酸根结合生成不溶于水的盐沉淀。试管3中只加有蛋白液和ZnSO4蛋白质分子因带较少的正、负电荷，与Zn2+不反应。第11页,共19页，星期六，2024年，5月2.乙醇沉淀蛋白质1）实验原理乙醇溶解于水，破坏蛋白质分子的水化膜，加入少量中性盐抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。第12页,共19页，星期六，2024年，5月2）操作步骤试剂（mL）试管1试管22.5%蛋白质溶液0.5mL0.5mL结晶NaCl—数粒（适量）无水乙醇1mL1mL现象3）观察、记录实验现象，并解释之。第13页,共19页，星期六，2024年，5月结果记录试剂试管1试管22.5%蛋白质溶液0.5mL0.5mL结晶NaCl—数粒（适量）无水乙醇1mL1mL现象沉淀沉淀充分第14页,共19页，星期六，2024年，5月实验现象分析试管1中加入无水乙醇，破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。试管2中加入无水乙醇和少量的氯化钠，不但破坏蛋白质分子表面的水化膜，同时蛋白质分子表面的电荷减少，沉淀更充分。第15页,共19页，星期六，2024年，5月五、注意事项1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污染试剂。2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。3.做完实验把把试剂按原样摆放，试管和刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，登记签名。4.值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。第16页,共19页，星期六，2024年，5月六、思考题1.临床抢救重金属中毒患者，为什么用鸡蛋清或牛奶？2.蛋白液中加入适量乙醇，为什么会产生沉淀？3.蛋白液在